质粒pcr条带拖尾现象严重，出现好几次，求解释？

这是条带图。

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推荐答案 2012-11-10

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第1个回答 2012-11-10

1 loading buffer 不对，
2 样品稀释后，加50%的甘油和溴酚蓝作为loading buffer追问

稀释多少啊？我使用的是东盛的mix。。。

追答

样品1比4稀释
10u l样品加 2ul loading buffer

第2个回答 2012-11-10

跑太快了吧还行啊反正条带清楚不过怎么marker都没有

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以质粒作为模板,pcr出现拖尾现象,为什么?答：我觉得原因是：你用的质粒浓度太高了。你要是按照普通基因组DNA PCR的浓度来做质粒PCR，或者稀释了质粒DNA但不够倍数，那结果有拖带是可能的。我一般20ul体系，质粒DNA浓度只需要0.05ng/ul 然后只取0.5-1ul。反应25-30个循环就很亮了。

pcr条带拖尾是什么意思答：PCR条带拖尾是指在聚合酶链式反应（PCR）过程中，DNA扩增产物在电泳分离时出现的一种现象。该现象是由于聚合酶在扩增反应末期，因为模板DNA已经完全扩增，但聚合酶仍在作用，使得扩增产物末端不断地添加不必要的碱基而产生的。这些多余的碱基在电泳分离时被视为拖尾现象。PCR条带拖尾在许多实验中都是被认...

您好,我的PCR突然出现了严重的拖尾,前面做的结果很好,近两个月阴性对照...答：原因： 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg2 浓度偏高 6.循环次数过多 对策： 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度 6.减少循环次数

...目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象,请教各位是什么原因...答：过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。9制胶过程中胶孔没制好。10 EB没有冲洗干净。11模板混有基因组DNA，或模板中混有蛋白。12非特异反映。引物设计的不好，非特异，这种情况容易出现非特异扩增造成有非特异性扩增带或拖尾现象。13电泳液用久了不换，...

PCR产物跑胶严重拖尾,换了好几种酶和体系也还是一样,(Tm为55,循环25...答：引物不合适吧，要不就是退火温度太低，或者模板量太多

这是我的pcr产物凝胶电泳图,哪位大神可以解答一下,为什么会出现前后拖 ...答：出现拖尾是很正常的现象，毕竟基因组序列那么大，出现一些与引物部分序列互补的序列区间也是可能的，如果是其他的DNA作为模板，则有可能是你的模板不纯造成的，另外体系中有些物质，比如SDS也可能显示一些假带，造成判带困扰，所以你可以无视这种现象，只关心你的目的条带是否扩增出来即可 ...

问一下,就是,请问电泳DNA是否出现拖尾现象是要怎么判断的?答：1. PCR产物出现拖尾的因素有很多，总结为一条，就是非特异性扩增过多。原因可能是：（1）模板不纯：解决方法，纯化模板（2） Buffer不合适：解决方法，更换Buffer （3）退火温度偏低：解决方法，适当提高退火温度（4）酶量过多：解决方法，适量用酶，或调换另一种酶（5） dNTP、Mg2+浓度...

PCR常见问题分析(无、非特异、拖尾)答：问题2：非特异性扩增现象：条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带原因：1.引物特异性差2.模板或引物浓度过高3.酶量过多4.Mg2+浓度偏高5.退火温度偏低6.循环次数过多对策：1.重新设计引物或者使用巢式PCR2.适当降低模板或引物浓度3.适当减少酶量4.降低镁离子浓度5.适当提高退火温度或使用二阶段...

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