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问一下,就是,请问电泳DNA是否出现拖尾现象是要怎么判断的?
如题所述
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推荐答案 2019-11-08
那琼脂糖凝胶电泳拖尾的几种情况及原因:
1. PCR产物出现拖尾的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是:
(1) 模板不纯:解决方法,纯化模板
(2) Buffer不合适:解决方法,更换Buffer
(3) 退火温度偏低:解决方法,适当提高退火温度
(4) 酶量过多:解决方法,适量用酶,或调换另一种酶
(5) dNTP、Mg2+浓度偏高:解决方法,适当降低dNTP和镁离子的浓度
(6) 循环次数过多:解决方法,减少循环次数
(7) 模板量少或引物量过多:解决方法,增加模板量,减少引物的用量
2. 提质粒的时候经常有这种个现象,有可能是样品浓度过高了。这种情况简单,稀释一下就行了。
3. 提基因组DNA的时候也常出现拖尾,最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质,蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作,减少蛋白质等杂质的出现。
4. 样品破碎或是被降解
5. 存在RNA:DNA前面的一片一般都是未清除的RNA,经过纯化,RNAse处理,就没有了
6. 电泳体系的问题:观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染:。建议更换缓冲液。
(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。
(3)电压太高:适当降低电压
(4)根据核酸片断大小,适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,
分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
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其他回答
第1个回答 2019-12-14
延长电泳时间,RNA拖尾会消失,DNA
主带
会变亮。
将电泳凝胶放置一段时间(如过夜),拖尾带会变暗甚至消失,而DNA主带会变亮(可能变模糊但不会消失)。
主带(长片段)是基因组DNA,拖尾带是残留的降解RNA条带。
同样条件提取的DNA(第六孔)残留的拖尾带是不连续的,集中在某一区域(可以解读为残留的降解RNA较少,如降解DNA的典型带型
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答:
图2是样品有少量降解,并且有RNA污染的。你的顶端有清晰条带说明降解较少,底端较亮说明RNA污染严重。你说一共有800ug,指的是你提的
DNA
吗,那么你是如何定量的,还有,你的样品是用来干什么用的。可以用RNase消化RNA,纯化方面,柱纯化一个柱子的最大量为10ug,很麻烦;磁珠纯化要纯化800ugDNA也需...
DNA拖尾现象是
什么原因
答:
1、
可以考虑是不是样品不纯,目的产物与杂带相差不大,所以要多跑一段时间才有尾巴
。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚蓝便可,注意上样浓度;3、可能是原液浓度太大造成的;4、可能DNA已降解。5、在提取前对样品进行一...
跑
dna电泳出现拖尾现象,
不知道为何?
答:
1.一般来说,marker除了能检测
DNA的
分子质量外,还可以侧面反应你的胶是否制的成功,从你的图上看,胶的问题比较大一些,胶的浓度和你溶胶的时间以及最后的溶解情况都有一些关系,跑过pcr后分子大小等出现了变化,也可能是受到了空气的污染等,为了检测你的maker是否有问题,可以在同块胶上点上别的MAK...
琼脂糖凝胶
电泳
跑的
DNA
为什么会
拖尾
答:
由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。对策:减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶;减少dNTP的浓度;适当降低Mg2+浓度;增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。琼脂糖的熔点在62〜65°C之间,...
彗星实验中正常细胞在哪些情况下会造成
电泳
后
出现拖尾现象
答:
彗星实验可以检测
DNA
链断裂损伤。可能有紫外线照射或其他因素造成了突变~~ 1988年Singh等[5]建立了碱性彗星实验,我们对该实验流程进行改良,首先改变了制胶方法,并在裂解后加入水洗的操作步骤,中和完成后再用梯度酒精脱水。具体流程如下:①镀膜法制备底胶,将洁净的载玻片在0.2%的常熔点琼脂糖中...
DNA
琼脂糖凝胶
电泳出现拖尾是
什么原因?
答:
电泳出现拖尾现象,
英文成为smear
,就是
弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:\r\n1、PCR产物自身原因:\r\n往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.\r\n对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③...
pcr条带
拖尾是
什么意思
答:
PCR条带拖尾是指在聚合酶链式反应(PCR)过程中
,DNA
扩增产物在
电泳
分离时
出现的
一种现象。该
现象是
由于聚合酶在扩增反应末期,因为模板DNA已经完全扩增,但聚合酶仍在作用,使得扩增产物末端不断地添加不必要的碱基而产生的。这些多余的碱基在电泳分离时被视为
拖尾现象
。PCR条带拖尾在许多实验中都是被...
这是动物基因组
DNA
提取实验的
电泳
图,右一时Marker,大家帮我分析
一下
...
答:
1 首先你的上样量太大,可能早晨有些
拖尾现象
;2 点样孔有东西,可能是有蛋白质污染,可以用酚氯仿抽提纯化看看还有没有;3 右起第二个样品,可能是RNA没有除干净,有RNA污染,可以用RNase处理一下;4 最左边一个样
,DNA
明显发生部分降解,有拖带。
大家正在搜
为什么电泳时会出现拖尾现象
电泳中出现拖尾现象是因为
电泳拖尾现象是什么
酶切电泳拖尾现象是什么情况
跑电泳出现拖尾怎么回事
什么是电泳拖尾
rna电泳拖尾现象
电泳拖带现象
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