这是我的pcr产物凝胶电泳图，哪位大神可以解答一下，为什么会出现前后拖带？怎样解决这个问题？？

Question

如题所述

Answer 1

正常现象，没必要大惊小怪，你如果是用基因组作为模板的话，出现拖尾是很正常的现象，毕竟基因组序列那么大，出现一些与引物部分序列互补的序列区间也是可能的，如果是其他的DNA作为模板，则有可能是你的模板不纯造成的，另外体系中有些物质，比如SDS也可能显示一些假带，造成判带困扰，所以你可以无视这种现象，只关心你的目的条带是否扩增出来即可

Answer 2

还有可能是你用的体系特异性不是很强，如果用普通的Taq酶扩增，尤其是基因组，这种情况比较常见的。如果你想特异性很好用做检测的结果，那么最好优化反应条件或者换用热启动酶，减少非特异性结合，这样拖尾就会少了。

Answer 3

首先你要告诉我你的目的片段有什么特点，比如是否是高GC或者是低GC，这样就更好分析了，就目前的线索来看，你可以试着提高你的退火温度并缩短退火时间至15秒，将延伸时间缩短至30秒，也可以将延伸温度由72℃提高至75℃。或者，根本原因出现在引物上，如果你以前用同样的方法同样的酶同样的引物做都没有拖尾现象，而模板也没有出现问题的话，那么就可以考虑是引物部分降解。追问

这些样品是pcr后送出去测序的，所以片段特点一无所知，引物没问题因为其他批次没有出现这种现象，只有这次出现了，会不会和循环次数有关？

追答

一般来说循环次数增加不会导致这么严重的拖尾现象，如果说你之前做的都很好只有这一次做得不好，那么只有两种可能，一个是模板由问题，模板不纯或者是浓度过低或过高，另一种情况，就是引物降解，这种可能性会更高一些，建议你如果有干粉引物再溶解一些，如果实在没有干粉也可以试着将100um的储存液再稀释一些到10um再做一次PCR试试。其实你这样的片段如果送到invitrogen测序的话，切胶回收再测序也有8成的机会能测出来。

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Answer 4

看你的marker都跑的很虚，该调调你的凝胶成像仪了，聚焦不准。
主带是很清晰的，没什么大问题，不影响切胶回收。
非要控制拖尾的话，建议适当提高退火温度，减少引物使用量。