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质粒pcr出现比质粒还大的条带
质粒PCR
后电泳
出现
很多
条带
怎么回事啊?
答:
回答:1.过火温度过低,可以提高退火温度 2.检查
PCR
体系各浓度 引物浓度不要太高 一般10UM
质粒
模板量一般1-10ng 过高和过低都可能导致非特异性 3.TAq酶不能加太多 一般1.25U/50ul ,特别是高活性酶,高浓度会导致大量非特异性扩增。4.引物本身设计具有较大缺陷
质粒PCR
后电泳
出现
很多
条带
怎么回事啊?
答:
1.过火温度过低
,可以提高退火温度2.检查PCR体系各浓度 引物浓度不要太高 一般10UM 质粒模板量一般1-10ng 过高和过低都可能导致非特异性3.TAq酶不能加太多 一般1.25U/50ul ,特别是高活性酶,高浓度会导致大量非特异性扩增。4.引物本身设计具有较大缺陷 ...
质粒PCR
后电泳
出现
很多
条带
怎么回事
答:
最常见的原因有:(1)引物特异性不好;(2)退火温度过低;(3)
pcr
体系有问题。
质粒PCR
后电泳
出现
很多
条带
怎么回事
答:
更改PCR条件~
提高退火温度~延长时间适当增加减少
再看看~
我自己设计引物,每次
PCR
结果
条带
大小都不一样,还有时候有有时候没有...
答:
在已经构建好的质粒上P条带,如果有非特异性扩增:
1.提高退火温度,或者加DMSO 2.引物设计有问题,与载体的全序列做一下BLAST 3.模板问题
,有些模板如果是高GC含量等原因,很难P
请问这个DNA电泳结果是什么情况?怎么分析?第一个是Marker
答:
有一条
条带
比marker最
大的
一条带都大,是没有切动的
质粒
,还是做
PCR
加了太多模板啊?最下面的部分如果是质粒样品,应该就是RNA没有消化,如果是PCR,就是有引物二聚体,总之电泳的这个样品不是很好。如果提的是细菌基因组的话,还说的过去,因为本身在抽提过程中有几个组分,一个是基因组DNA,会...
以
质粒
作为模板,
pcr出现
拖尾现象,为什么?
答:
我觉得原因是:你用的质粒浓度太高了。你要是按照普通基因组DNA PCR的浓度来做
质粒PCR
,或者稀释了质粒DNA但不够倍数,那结果有拖带是可能的。我一般20ul体系,质粒DNA浓度只需要0.05ng/ul 然后只取0.5-1ul。反应25-30个循环就很亮了。
PCR
之后的电泳
条带
有好多条是怎么回事?
答:
引物的特异性设计有问题 或者你的引物加多了 导致了特异性的降低 或者
质粒
有污染 但是如果聚合酶或者dNTP加多了的话也是会降低特异性的 所以什么都不要加太多 不要以为加得越多反应越好
为什么
PCR
时会有杂带?引物没有污染,退火温度改了好多次,是特异性不好...
答:
非特异性
条带
的出现.其原因:一是引物与靶序列不完全互补. 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高.退火温度过低.及
PCR
循环次数 过多有关.其次是酶的质和量.往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现.酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有:①必要时重新设计引 物.②...
PCR
产物为什么会
出现
100~200bp
的条带
答:
可能是
PCR
反应条件不是最佳。退火温度比较低会造成非特异
条带
的扩增。建议稍微提高一点(但调的太高会扩增不出来,你最好多试试梯度)
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