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pcr没有条带
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PCR
扩增后
没有条带
是怎么回事?
答:
酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是
PCR
失败或扩增
条带
不 理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度 高,一条...
PCR
时,跑了8个样本,有5个
有条带
,另外3个
没有
,可能有哪些原因造成?
答:
如果八个样品是同一个物种同一对引物,PCR试剂也用的是一样的,
那么可能是模板浓度过高或者过低,降解,或者是模板中杂质过多,或者是模板被污染
(抑制剂,或者提DNA有东西没除干净,或者外来污染),或者是DNA没提好(片段被打碎,质量差等等),或者是反应条件不是最优条件,质量稍差的模板难扩出来 ...
为什么做
pcr
结果只有引物二聚体而
没有
目的
条带
呢?
答:
也可以提高特异性,但都会导致扩增效率的下降,需要根据具体的实验要求优化合适的条件;或者适当减少引物用量、模板量,过量的模板也会抑制特异性扩增。引物加入量过高也会导致非特异性扩增,引物使用量请参考说明书。
pcr
检测跑胶时,为什么mark很漂亮,可是样品
条带没有
呢
答:
(1)PCR产物没有扩增条带
,
这个原因就包括引物、反应条件、模板等等了
(2)marker选择不合适;(3)点样漏了等等
RT-
PCR
产物电泳结果只有引物二聚体,
没有
目的
条带
,更换引物了也这样...
答:
1. 我认为你的引物浓度基本是合理的,而且引物浓度在一定范围内不会造成没有目的条带的现象
。2.如果你是选用与外文文献相同的引物,可以参考他的反应条件,或者在他的退火温度上降低2-3度。3. 我觉得你的模板浓度已经不小了,我的PCR只用了30ng或者3ng。上述条件没给出扩增的循环数,建议查查文献,...
PCR
跑胶的完成的时候,Mark特清晰,但样品甚至连
条带
都
没有
,做了好几次...
答:
原因是你的样品
PCR没
做成功,可能性大 样品跑出去了,可能性小 而且你说电泳液热,而且胶倒是因为电泳的电压大时间长 把电泳液加热了,胶都融化了 和电泳条件应该无关,除非电压大时间长你的片段“跑出去”了 至于电泳液发热的情况我也遇到过,但是具体原因我也不是很清楚 可能是缓冲液配置的问题,...
...
PCR
,提取的是动物细胞,DNA电泳有痕迹却
没有条带
,可能的原因有哪些啊...
答:
如果你的引物
没有
经过验证也有可能是引物设计不合理或者扩增条件不合适,这种情况下你只需要加上成熟扩增的内参基因平行试验即可。内参扩增好,目的
条带
不好大多数是扩增条件不合适或者引物设计不合适。cDNA模板过多或者过少都会影响
PCR
扩增,很多同学担心自己的cDNA浓度低,实际上好多时候cDNA浓度过高也会影响...
PCR
产物电泳时
没有
明显的
条带
,但有拖尾,maker无拖尾。反映体系如下...
答:
你的
PCR
反应体系中
没有
加MgCl2吗?Mg2+在PCR反应中发挥了重要作用,Mg2+浓度越高,Taq酶活性越强,
条带
越亮,但非特异性也较强,杂带越多;Mg2+浓度过低则影响PCR扩增产量,甚至使PCR扩增失败而没有扩增条带。那个拖尾可能是引物二聚体
普通
PCR
为什么只有引物二聚体
没有
目的
条带
?
答:
那可能你的条件不是很适合,所以
没有
P出来,你可以改变模板的浓度,还可以改变退火温度,还可以加入Mg ,DMSO等.
...条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也
没有条带
...
答:
阴性对照的作用就是来判断实验是否有污染的,如果
PCR条带
和阴性对照都弥散的话,原因应该是污染。污染一般有试剂的污染,也有可能是环境的污染。先说试剂的污染。你设置的阴性对照所用的每一种试剂都存在被污染的可能,最实际也最麻烦的方法就是,每次更换一种试剂,重复实验,从而确定那种试剂发生污染。
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