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您好,我的PCR突然出现了严重的拖尾,前面做的结果很好,近两个月阴性对照也拖尾
降低模板量也不行,不知道什么原因,就是突然出现的。
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第1个回答 2014-05-08
原因: 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg2 浓度偏高 6.循环次数过多 对策: 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度 6.减少循环次数
追问
那我前面是一样的条件怎么不会出现拖尾呢?前面做的是一样的体系一样的条件啊
相似回答
质粒
pcr
条带
拖尾
现象
严重,出现好
几次,求解释
答:
1,引物设计不佳,造成了拖尾现象。2,PCR中DNA浓度加的太多,造成了拖尾。3,mg2+浓度加的太高,造成了拖尾
。
4,跑胶电压不合适
,造成了拖尾。5,退火温度不合适,造成了拖尾。这些都可能造成拖尾,请认真分析之。谢谢。
如何解决
PCR
产物电泳
拖尾
现象
答:
这个可能与DNA降解有关,导致了DNA不纯
所以会拖尾 解决方案 加电压 跑得快 避免与手接触 要去除核酸酶 加些SDS吧 这只是理论看法 未经实践 希望对你有帮助 如果有条件 就试一试 记得告诉我结果 谢啦^ ^
pcr
跑胶
结果出现拖尾
、弥散说明什么?
答:
可能是产物降解,也可能引物、模版的量上的比较大
。适当减少循环,调整引物、模版的量
pcr
条带
拖尾
是什么意思
答:
PCR条带拖尾在许多实验中都是被认为是一种干扰因素
。因为拖尾现象在PCR扩增反应过程中是随机出现的,这就导致同一反应体系中不同扩增产物的长度各异。这会给后续工作带来很多麻烦。比如,在基因定位、测序等应用领域,PCR条带拖尾会影响扩增产物的准确性和重复性,从而影响结果的可靠性。为了避免PCR条带...
以质粒作为模板
,pcr出现拖尾
现象,为什么?
答:
我觉得原因是:你用的质粒浓度太高了。你要是按照普通基因组DNA
PCR的
浓度来做质粒
PCR,
或者稀释了质粒DNA但不够倍数,那
结果有
拖带是可能的。我一般20ul体系,质粒DNA浓度只需要0.05ng/ul 然后只取0.5-1ul。反应25-30个循环就很亮了。
问一下,就是,请问电泳DNA是否
出现拖尾
现象是要怎么判断的?
答:
1.
PCR
产物
出现拖尾
的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是:(1) 模板不纯:解决方法,纯化模板 (2) Buffer不合适:解决方法,更换Buffer (3) 退火温度偏低:解决方法,适当提高退火温度 (4) 酶量过多:解决方法,适量用酶,或调换另一种酶 (5) dNTP、Mg2+浓度...
电泳DNA时
,拖尾
现象很
严重,
造成这种现象的原因
有
哪些?
答:
电泳
出现拖尾
现象,英文成为smear,就是弥散。其原因,主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成
PCR的
非特异性产物 过多。对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低...
这是
我的pcr
产物凝胶电泳图,哪位大神可以解答一下,为什么会
出现
前后拖 ...
答:
出现拖尾
是很正常的现象,毕竟基因组序列那么大
,出现
一些与引物部分序列互补的序列区间也是可能的,如果是其他的DNA作为模板,则有可能是你的模板不纯造成的,另外体系中有些物质,比如SDS也可能显示一些假带,造成判带困扰,所以你可以无视这种现象,只关心你的目的条带是否扩增出来即可 ...
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