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pcr条带弥散拖尾
PCR
跑胶,目的
条带
很亮,但是边沿不清楚,前后有
拖尾
现象,请教各位是什 ...
答:
4减少循环次数,减少非特异性扩增
。5电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显 改变。6电泳时电压不能太高,8V/cm。7一般来讲,基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中,Mg和dNTP的浓度是相 匹配的,不需改动。8 加样量过大。过多的量会造成加样孔超载,从而导致拖尾和弥散,对于较大的DNA此现象更...
质粒
pcr条带拖尾
现象严重,出现好几次,求解释
答:
1,引物设计不佳,造成了拖尾现象
。2,
PCR中DNA浓度加的太多,造成了拖尾
。3,
mg2+浓度加的太高
,造成了拖尾。4,
跑胶电压不合适
,造成了拖尾。5,退火温度不合适,造成了拖尾。这些都可能造成拖尾,请认真分析之。谢谢。
pcr条带拖尾
是什么意思
答:
PCR条带拖尾是指在聚合酶链式反应(PCR)过程中,DNA扩增产物在电泳分离时出现的一种现象
。该现象是由于聚合酶在扩增反应末期,因为模板DNA已经完全扩增,但聚合酶仍在作用,使得扩增产物末端不断地添加不必要的碱基而产生的。这些多余的碱基在电泳分离时被视为拖尾现象。PCR条带拖尾在许多实验中都是被认...
如何消除
PCR
的
拖尾
答:
消除PCR拖尾的方法:
1、纯化模板 2、更换Buffer 3、适当提高退火温度 4、适量用酶 5、适当降低dNTP和镁离子的浓度 6、减少循环次数
PCR拖尾产生的原因:1、模板不纯 2、Buffer不合适 3、退火温度偏低 4、酶量过多 5、dNTP、Mg 2*浓度偏高 6、循环次数过多 ...
pcr
跑胶结果出现
拖尾
、
弥散
说明什么?
答:
可能是产物降解,也可能引物、模版的量上的比较大
。适当减少循环,调整引物、模版的量
PCR
部分样本
条带弥散
,怎么办
答:
观察是否
条带拖尾
。其次引物可以重新稀释,换
PCR
体系,防止污染或者引物降解。另外出现这种涂抹带还有可能是酶加多了,甘油有影响,注意吸取酶的量。考虑到你的引物是成熟的,如果所有组是同样的体系同时做的话,则实验中的成功案例可视为阳性对照,因此考虑模板降解的可能性更大。建议重新准备模板。
跑胶
弥散
和
拖尾
各是什么现象
答:
电泳出现
拖尾
现象,英文成为smear,就是
弥散
。其原因,主要从以下两个方面考虑: 1、
PCR
产物自身原因: 往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。 对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③...
pcr
产物在电泳仪中跑胶出现
拖尾
现象是怎么回事
答:
有一下几种可能性:
PCR
扩增产物浓度很高,overloading造成的拖带 模板量加太多了 引物或者模板的原因,
条带
扩增的时候带入了很多杂带
为什么
pcr
的时候,DNA模板浓度高了,会有
拖尾
?
答:
因为
pcr
利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。DNA模板纯度不纯的时候,会对
PCR
起抑制作用。PCR反应中,模板只要1ng就可以,所以模板浓度不要太高。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)。并混入限量的一种不...
PCR
产物跑电泳时发生
拖尾
,这是什么原因造成的
答:
你的
pcr
反应体系中没有加mgcl2吗?mg2+在pcr反应中发挥了重要作用,mg2+浓度越高,taq酶活性越强,
条带
越亮,但非特异性也较强,杂带越多;mg2+浓度过低则影响pcr扩增产量,甚至使pcr扩增失败而没有扩增条带。那个
拖尾
可能是引物二聚体
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