随机引物法克隆未知序列基因的介绍哪能找到？生物实验方面的网站有哪些

Question

如题所述

Answer 1

引物设计是分子生物学常用技术，引物质量有可以影响实验质量，利用优化的引物会使实验取得良好的实验结果，否则会加大后续的工作量，实验可能一无所获。可以去生物帮那里看一看，那儿提供最新、领先、精准、高效、全面的生物产品和技术信息。 技术文档，视频资源都是蛮丰富的。 随机引物PCR(arbitrarily　primed　PCR,AP-PCR)首先被用于基因组DNA或RNA的指纹图谱(finger　print)分析,后来也有人将这种方法用于克隆与表型相关的基因或mRNA。该方法的理论依据是:表型受基因支配,在一个生物体发生了表型变化后,其基因组DNA很可能发生变化或出现不同基因的激活或关闭等;另一方面,如在寄生虫的发育过程中,不同发育阶段的虫体所表达的基因很可能不同,如将不同发育阶段的虫体mRNA提取出来,用单一引物(随机引物,其长度不超过16 nt)对不同时期的虫体mRNA进行扩增比较,即可找出导致表型变异的遗传学依据。这种方法是一种比较PCR,它要求至少有2种来自不同表型但又很类似的基因组DNA或mRNA。AP-PCR扩增后的产物必须99%是一致的,只有个别特异的产物出现在特异的表型个体中。该方法对表型或种源关系相差甚远的生物个体之间没有比较意义.。可参考：That can help you.Click www.bio1000.com/zt/gene/4068.html, Sign in account.应用AP-PCR法进行2种或多种表型特征类似的个体间指纹图谱分析或表型相关基因克隆　箭头所指扩增带为特异于个体(Ⅱ)的扩增产物AP-PCR的操作一般采用两步法,即前10个循环多以较低的退火温度(annealing　temperature)进行扩增,后20个循环则采用较高的退火温度扩增。AP-PCR产物多较短,一般需高浓度的琼脂糖凝胶检测,也可用聚丙烯酰胺凝胶检测。如扩增的模板为mRNA,通过比较扩增产物的强度,可以得知该基因在2种生物或同一生物不同发育阶段的表达强度。另外,在AP-PCR检测到与某一表型相关的基因或基因产物(mRNA)以后,下一步工作就是克隆出整个基因或mRNA。主要操作程序为:(1)AP-PCR产物的提取、克隆及序列测定。首先将AP-PCR检测到的特定片段从凝胶中切下,提取DNA克隆到适宜的载体内(如TA载体),再测定其核苷酸组成。根据其核苷酸组成设计2个方向相反的引物(P-1,P-2)。引物长度多在20 nt以上;退火温度在60℃以上;(2)将基因组DNA做适当酶切,然后在其两端连接上相同的接头,。根据接头的序列扩增。
双链DNA探针随机引物合成法随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活性,反应稳定,可以获得大量的有效探针。(2)反应时对模板的要求不严格,用微量制备的质粒DNA模板也可进行反应。(3)反应产物的比活性较高,可达4×109 cpm/μg探针。(4)随机引物反应还可以在低熔点琼脂糖中直接进行。

Answer 2

一般需高浓度的琼脂糖凝胶检测,

Answer 3

可以去生物通搜一下

Answer 4

可以搜一下