对一种未知菌的基因,能否根据同属菌的基因序列设计引物,扩增出未知基因,该基因克隆的成功�%C

Question

请高手指点。
只知此菌的属。而且知道同类菌的关键酶了。我想问这样做的成功率是多高。

Answer 1

一般来说成功率是很大的，而且基本上也是你只能用的方法吧。但具体也要看你怎么设计。多分析几种相近细菌的该基因序列，同源比对，找到最保守的编码区，在这些位置设计引物，成功率可大大提高。
脊椎动物中，比如人，鼠，猪，牛，鸡，即使这么大的分类差别，还有基因中麻烦的内含子的问题，利用基因编码区的保守性来设计引物扩增目的基因，成功率也是很大的。
况且，合个引物，跑个PCR成本也不大，你完全可以去试验看看啊，再高的成功率你不跑一下，谁也说不准。

Answer 2

你的问题很笼统，不好回答。你的这个未知菌既然是未知的，你怎么知道它和别的菌属于同一属的？既然是不是同一属的也不知道，是不是同一种的也不可知，所以不好根据你提供的信息来回答你的问题。

Answer 3

成功率依靠你的引物设计以及pcr体系条件的优化~~~
引物的设计可通过同属中不同菌株的DNA序列比对，得出保守序列来设计，pcr体系可搞个正交优化。
鉴于既无此菌的DNA序列，引物设计有一定困难，且pcr有一定不确定性（有时看你的RP哈），成功率60%
当然，如果对分子试验相当熟悉，成功机率还是很高得