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基因克隆设计引物
克隆
cdna全长在哪
设计引物
答:
在头尾两端
设计引物
。1、cdna序列选取一组引物,要求引物混合中不同引物的Tm值相近。2、cdna序列和所选的引物,计算符合头尾位点要求的引物混合成分。3、计算出来的比例和用量,混合所需的引物,得到最终用于扩增cdna全长的引物混合。
克隆基因
和
设计引物
有什么区别呀?
答:
做表达用的
引物
(比如实时荧光定量PCR)一般是根据
基因
的cDNA序列
设计
,扩增的片段最好在80-150 bp范围,而且要求特异性要高,退火温度一般设置在60度左右,引物扩增效率要高;做克隆用的引物要求相对宽松,只要能够得到目的基因就可以了。
pcr产物直接做无缝
克隆
如何
设计引物
答:
无缝
克隆
反向
设计引物
方法如下:线性化目的载体:用酶切或是PCR方式;PCR获取目的片段。无缝克隆的原理首先要强调的是,无缝克隆有两个主要的流派:Gibsonassembly和GoldenGateassembly。退火温度需要比解链温度低5℃,如果引物碱基数较少,可以适当提高退火温度,这样可以使PCR的特异性增加;如果碱基数较多,...
设计克隆
小鼠可变区
基因
的
引物
时,应注意哪些事项
答:
发夹结构、反向配对、GC含量、退火温度、引物长度、端最好是C、G(提高结合度)、引物在序列中的错配位点。大致就这几个方面,重要性依次降低,由其是3,端绝对不能形成发夹结构。其实
设计引物
都只是好中选优的问题。以20bp为例,这段序列从第四个碱基开始就可以设计引物。
克隆
,在台湾与港澳一般意...
用rna反转录的cdna
克隆基因
的cds全长怎么
设计引物
答:
有
基因
序列号,你就可以直接上genebank下载其序列,下载到全序列,你需要扩增的CDS区,也就是编码区,可以全外显子扩增,这样简单一点,也可以做cDNA
克隆
,然后再做,前者的话就可以直接根据其基因序列NG号
设计引物
,如果是做CDNA的话就根据其mRNA的序列NM号设计引物. 你是根据其cDNA设计的引物,你需要下提取mRNA...
基因克隆
的基本步骤有哪些
答:
(2)PCR筛选和限制酶酶切法:提取转化子中的重组DNA分子作模板,根据目的
基因
已知的两端序列
设计
特异
引物
,通过PCR技术筛选阳性
克隆
。PCR法筛选出的阳性克隆,用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。(3)核酸分子杂交法:制备目的基因特异的核酸探针,通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的...
我如果目的是为了得到该基因的表达产物,而
克隆基因
,那么
引物设计
是否上 ...
答:
既然要表达该
基因
的产物,自然要表达完整的基因。所以上下游
引物
就是在你序列的两端了。序列应该以CDS序列。我们是以RNA为模板反转录后扩增。记得加上酶切位点。
基因
的
克隆
,转导,表达,在对目的基因PCR时,为什么一些人
设计
的上游
引物
不...
答:
克隆基因
的编码框时,必须从ATG开始或UTR处开始。当你想表达这个基因时,PCR产物必须包括完整的读码框;当你需要该基因融合GFP时,不仅需要从ATG开始,终止密码子必须突变掉,而且目的基因与GFP必须在一个读码框中。而需要监测目的基因的表达水平时,如果使用RT-PCR,则最好是从基因的中上段开始
设计引物
...
求教在
基因克隆
中要
设计引物
的方法!???
答:
1 你先看你想连接的载体上面有哪些
克隆
位点(酶切位点可以用),然后看你原来的质粒上
基因
两端有没有这些位点,如果有,ok,同时用两个酶切质粒和载体,然后目的片断相连;2 质粒上没有想要的位点,就用
引物
将基因扩增出来,分别在上下游引物的5端加上特异酶切位点和保护碱基,PCR扩增后,纯化酶切...
引物
基因
构建
克隆
载体与表达载体 重组子的筛选 诱导表达以及如何检 ...
答:
1、一般是通过设计软件,例如oligo6,primer5等,你可以在网上搜一下
引物设计
软件下载和使用说明,是比较容易的。我一般用DANMAN
设计引物
,这个软件操作简单,占用资源也小。至于设计引物的一般原则如下:序列选取应在
基因
的保守区段 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状...
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