根据现有的分子生物学技术如何克隆一个目的蛋白质基因

Question

如题所述

Answer 1

1.确定好是哪个蛋白基因后，上NCBI网站，查询该基因序列，做表达研究一般为mRNA序列，做调控研究一般为5‘非翻译区等调控区序列；
2.然后以该段序列为模板应用prime3或prime5设计引物（引入目标载体酶切位点），通过PCR反应把该序列大量扩增；
3.通过酶切后产生粘性末端后连入表达载体，构建成重组目标基因载体。

Answer 2

根据蛋白质序列，设计一对引物，能够得到核心序列，在根据核心片段做RACE获得3‘端和5’端，然后电子拼接，根据电子拼接设计全长引物，这样获得的片段比较完整。