如果质粒与目的基因结合的重组DNA和不含目的基因的质粒，同时在培养基中表达，怎样区分和筛选出目的基因？

如题所述

推荐答案 2012-02-12

一般有两种方法，一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板，进行PCR扩增。看能否出现目的基因的扩增产物。还有一种是将纯化的质粒进行酶切，因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点，只要用这些内切酶进行酶切，然后看能否有目的基因的片段被切下来，则可以判定目的基因有没有插入。另外，在有些载体中（如T载体）目的基因是插入在某些标记基因内部的，这样如果标记基因表达正常则没有插入，如果标记基因不表达，那么则正常插入了。如T载体中的LacZ基因。

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其他回答

第1个回答 2012-02-12

那要看商品化的质粒上带有什么样的筛选序列了,如果质粒上带有lacZ的话可以做蓝白斑筛选（白色为有质粒插入），当然也可以像楼上说得那样做质粒抽提然后作特异性酶切验证，即切下的片断大小是不是和你插入的目的片段大小一致。不管哪种方法关键还是要看质粒的说明书。

第2个回答 2012-02-12

PCR或者酶切验证
PCR扩增目的基因看看有没有插入
酶切特异位点看看目的基因有没有插入

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用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也...答：第一步是筛选出含有载体标记基因的连接产物，这样的产物可能有载体-目的基因连接和载体-载体连接，利用的一般是载体上的标记基因的抗性培养（一般的标记基因是抗四环素或者是抗氨苄青霉素基因，只要用四环素或者是氨苄青霉素的培养基就可以了）。第二步是筛选出载体-目的基因，在上一步的培养基上挑菌，扩大...

科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组,并在大肠杆菌中成功表达...答：（1）将质粒切割开用限制酶，将目的基因与质粒连接起来用DNA连接酶．（2）由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中．（3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入受体细胞．（4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长...

...质粒,将目的基因与质粒相结合组成新的DNA分子,然后质粒导入_百度...答：从而产生了包含有你所需要的那段DNA片段的包装病毒颗粒存在于细胞培养液中，用这类培养液多次刺激细胞，就能够稳定转染所需细胞，构成稳定的表达谱。综上所述，细胞体内的质粒是插入基因组后，随基因组表达而表达的。

...我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个答：用扩增好的菌液来抽提质粒就得到比原先多得多的目的基因拷贝数。如果用的是合适的菌种，那些菌液还可以用来诱导表达相应的蛋白质（假设这是编码原核生物蛋白的基因或者是用cDNA整出来的而且能在原核生物正常表达的基因）。如果扩增出来的质粒没有重组基因怎么办？对抽提出来的质粒进行DNA测序就知道有没有...

目的基因与质粒重组答：目的基因就是含有我要的那个DNA片段，当然还有其它无关片段，与质粒重组的后叫重组质粒。限制性内切酶不可能就刚好切出需要基因，少切了会破坏需要基因，多切了倒可以，只要有需要基因就能表达出相应产品。

在基因工程中,标记基因是怎么标记的?同位素标记法?答：1、“作为重组DNA载体的重要标记”举例：大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因（该基因可以认为是标记基因），当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当人们用选择培养基（比如含有青霉素的培养基），来培养...

经酶切处理过的质粒但是目的基因未导入成功,能否表达出它原有的标记基 ...答：将质粒导入受体细胞后，如果只能在含有青霉素的培养基上生长但不能在含有四环素的培养基上生长的受体细胞，就是导入重组质粒的，也就是含有目的基因的；如果既能在含有青霉素的培养基上生长也能在含有四环素的培养基上生长的受体细胞，就是只导入质粒的，也就是不含有目的基因的。

如何使目的基因与质粒结合形成重组质粒?答：露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合形成重组质粒。质粒是目的基因的运载体，在用鸟枪法或人工合成法提取目的基因后，用限制性内切酶将质粒切开，使目的基因与切开的质粒具有相同的粘性末端。它们的碱基恰好配对，氢键自动结合，再用DNA连接酶将切口补上，重组质粒就形成了。

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下图表示含目的基因的DNA片段目的基因与质粒的关系质粒和目的基因怎么连接质粒与目的基因的连接方式目的基因DNA和cDNA 将目的基因与载体DNA拼接的酶实现目的基因与载体DNA拼接的酶目的基因与质粒反向连接用两种酶切目的基因和质粒