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线状质粒能否表达,是不是质粒酶切后一定要再连接,上面的抗生素标记才会表达?
如题所述
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推荐答案 2011-06-04
线状DNA可以表达,但是线状DNA稳定性差
另外如果质粒不成环的话,没法复制,因为质粒复制是从ORI(复制起始位点)开始滚环复制的,不成环的话到了断口就停下了。不能复制的质粒,没法随细菌分裂而扩增,这样细菌分裂几代以后质粒就丢光了,也就不存在什么抗性了。
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其他回答
第1个回答 2011-06-04
线状质粒不能表达,是一定要连接后上面的抗生素基因才会表达……
相似回答
经
酶切
处理过的
质粒
但是目的基因未导入成功
,能否表达
出它原有
的标记
基 ...
答:
经酶切处理过的质粒但是目的基因未导入成功,可以表达出它原有
的标记
基因的性状。那如果解决这个问题呢,人们一般在质粒上放有两个以上的标记基因,如果一个是抗青霉素的,一个是抗四环素的,将目的基因加到质粒上时,将目的插到抗四环素的基因中,这样,这个质粒就没有抗四环素的性状了。将质粒导入受体...
...只要
质粒
上含有
抗生素
基因就能在抗生素培养液中生存,如果没
表达
呢...
答:
所以只要菌体内有这种带上了抗
抗生素
基因的质粒,菌就可以抵抗抗生素对它的毒杀作用,就可以生存。我们是将目的基因在
质粒的
多克隆位点(MCS)处
连接,
成为重组
质粒,质粒
上要有相应
的标记
基因以方便筛选转化子,一般就是用抗生素抗性基因,在含有抗生素的选择培养基中培养菌体就可筛选出成功导入质粒的菌落。
质粒酶切
答:
应该能的
,没有酶切的载体有很大一部分是超螺旋的,会跑得比本来的大小快,酶切结束后就线性化了。你在做连接时加一个只加载体不加insert的对照,如果对照不长的话证明载体切得没问题。你就多做几个载体和Insert的比例,4度连接过夜,一定能长。另外,insert可以多加一点 ...
构建
质粒表达
载体为什么要先连T载再连pmv261?
答:
不用每个单菌落都拿去做colony PCR或提
质粒酶切
验证。当然也不是绝对的,我们实验室就经常直接把片段
酶切后连接表达
载体,不经过T载体这一步,其实影响并不大。如果你的情况比较特殊(比如片段较大,或是对应的表达载体拷贝数较低等),可以考虑连接T载体,不然的话不是非常必要。
近期在
质粒
构建是PCR和
酶切后
都有目的条带,但是就
是连接
转化后没有点...
答:
看看
酶是否
有问题,感受态是否有问题
,抗生素是否
有问题,等等 按你给的线索,菌落很少,很有可能是切开的线性质粒没有连上片段,转不进细胞,少量没有切开的空载体转进细胞,形成阴性菌落。问题可能在片段酶切上,建议连T载体
再切,
或双酶切换成两步单
酶切,
或换酶切位点,或重新设计保护碱基 ...
质粒
载体图谱是怎样
的?
答:
图谱中的MCS或者许多内切酶排排坐的部分,就
是质粒的
多克隆位点。多克隆位点为一系列限制性内切酶酶切位点,是外源DNA的插入位点,一般可通过酶切/
连接的
方式将外源DNA插入质粒。相关信息:质粒载体中除复制起始位点、筛选标记、多克隆位点外,还具有其他一些表达或调控元件,如转录调控元件、翻译调控元件和...
质粒,
目的基因
酶切后
分离纯化
再连接,是
指酶切液经过一系列处理后连接还...
答:
质粒,
目的基因
酶切后,
酶切液琼脂糖凝胶电泳,将含目的条带的凝胶切下来,进行胶回收,然后再在
连接酶的
作用下,4度和16度都可以(看你的目的基因的情况决定),将目的基因与目标
质粒连接
在一起。
两个
酶切后是不是
只有目的基因与
质粒
连,也就是不用再筛选了?
答:
非也!目的与目的连
,质粒
与质粒连的情况同样会发生。
一定要
筛选!
大家正在搜
质没有酶切的质粒只有一条带
质粒酶切后会出现几条带
标准质粒酶切后有三个条带
质粒酶切后没有条带了
质粒酶切三条带的原因
质粒双酶切后降解了
质粒单酶切三条带
酶切质粒载体
质粒酶切时间
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