（2010?朝阳区二模）如图是将人的生长激素基因导入细菌细胞B制造工程菌的示意图．已知细菌细胞B不含质粒A

Question

（2010?朝阳区二模）如图是将人的生长激素基因导入细菌细胞B制造工程菌的示意图．已知细菌细胞B不含质粒A，也不含质粒A上的基因．质粒A导入细菌细胞B后，其上的基因能得到表达．请回答下列问题（1）目的基因可通过PCR技术获取，这一技术中需要的酶是______．（2）将目的基因与质粒结合形成重组质粒的过程中，需要的工具酶有______．（3）若要检测目的基因是否导入，可在培养细菌B的培养基中加入______（氨卞青霉素/四环素），若在培养基上观察到大量的细菌B的菌落，表明目的基因已成功导入细菌B，此时所用的培养基属于______培养基（按功能分）．（4）若要比较准确地了解转化率，一般可通过统计菌落的数目来推测活菌数目，还可以通过______方法统计统计活菌数目；前者统计的活菌数目比实际的数目______（多；少；一样），原因是______．为了保证统计数目的准确，还应该设计______．

Answer 1

（1）PCR扩增技术是在模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物存在下，依赖于热稳定DNA聚合酶（Taq酶）促合成反应．
（2）将目的基因与质粒结合形成重组质粒的过程中，需要同一种限制酶切割目的基因和质粒，使他们露出相同的末端，在用DNA连接酶连接形成重组质粒．
（3）通过抗性基因可以检测目的基因是否导入．据图可知，重组质粒时抗氨苄青霉素基因被破坏，而抗四环素基因没有被破坏．因此可在培养细菌B的培养基中加入四环素，若在培养基上观察到大量的细菌B的菌落，表明目的基因已成功导入细菌B．所用的培养基属于筛选用的．
（4）通过显微镜直接统计菌落的数目，通过统计菌落的数目来推测活菌数目比实际的数目要少．当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落，不是很精确，所以要设计对照实验来确定统计数目的准确．
故答案为：
（1）耐高温的DNA聚合酶
（2）限制性核酸内切酶、DNA连接酶
（3）四环素    选择
（4）显微镜直接计数　　少         当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落       对照组