转基因得到了转化苗,做PCR的时候,如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有条带 是不是就能确定没转进去基因

第一次做的时候,质粒是阳性的,样品有2个在目的片段那也出现了条带,但很暗,后来再做实验,那两个很暗的条带也没有了,而且每次都会出现非特异性条带,是怎么回事?
求高手帮忙解答。

第1个回答  2011-08-01
除了质粒,你还应该加一个水作为副对照检验是否是实验操作问题。另外还有一个野生型做正对照,看与质粒和实验组的对比。你可以在PCR前电泳检查一下看是否有条带,有可能你提取基因组出了问题也说不定,还有就是DNA被降解了追问

基因组提出来了,PCR之前跑电泳了,基因组没有问题
现在又出现新问题了“做PCR检测转基因植株时,引物为300bp左右,质粒在300bp左右出现了条带,而基因组在300bp左右没有条带,在700bp左右出现条带,是什么原因”

第2个回答  2011-07-30
首先是你确定把目的基因连进载体了么? 然后就是你怎么确定那是非特异性条带 和目的基因大小差别很大么 如果不是太大你就应该回收下来拿去测序看看 一般验证你基因是否转进去了应该用real time更好本回答被提问者采纳
第3个回答  2011-07-31
1、引物特异性可能不好;
2、没转进去;
3、转进去之后丢失
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