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siRNA转染目的
siRNA转染
肝癌HEPG2细胞,沉默miRNA是什么意思?是为了沉默miRNA的靶基因...
答:
因为mRNA是单链的,沉默的意思就是让他无法翻译,即合成一小段与他互补的mRNA链,二者通过碱基互补配对结合,组织原mRNA与核糖体结合从而阻止翻译过程,即为沉默,干扰mRNA就相当于对基因表达的干扰 (说实话我不愿意找我高中的卷子了,不然一定把图和详解给你发上来)望满意 ...
siRNA转染
和DNA转染有什么区别?
答:
其次,
siRNA转染
比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果,这对于过量表达的DNA转染来说,一些实验的影响不大,但对于以研究基因干扰为主要
目的
的RNAi实验来说,就是致命的,因为细胞死亡和RNAi实验造成的结果在现象上是一致的,轻则...
siRNA转染
后
目的
基因未被干扰,该怎么办
答:
siRNA
干扰不成功,可能有多方面的因素,首先我们需要确认一下
转染
是否成功,或者阳性对照对否可以干扰成功,如果转染成功,阳性对照也可以干扰成功,但干扰效果又不理想的话那么可能的原因或许是:1、转染效率的问题。虽然siRNA可以转入细胞内,但是由于转染效率低,进入细胞的siRNA太少,无法发挥正常功能。2、...
siRNA的
筛选求教
答:
首先需要针对
目的
基因设计高效的siRNA干扰片段。一般设计3-5条siRNA,然后对目的细胞进行转染,转染后24~72 h进行表达量检测,最佳检测时间与细胞类型、转染试剂、 检测 目的等相关。1) RNA水平的检测:采用qPCR检测方法,
siRNA转染
后24~72 h即可检测到 mRNA表达明显降低;2) 蛋白水平的检测: 主要为West...
siRNA
是什么
答:
siRNA
指的是
小干扰RNA
。小干扰RNA有时称为短干扰RNA或沉默RN,是一个长20到25个核苷酸的双股RNA,在生物学上有许多不同的用途。已知siRNA主要参与RNA干扰现象,以带有专一性的方式调节基因的表达。此外,也参与一些与RNAi相关的反应途径。
悬浮细胞
转染
步骤及优化注意事项
答:
以24孔板
siRNA转染
为例 1. 提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×10^5,那么就用2×10^5的细胞进行转染。2. 转染过程 ⑴ 取0.67μg (50pmol) 的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA...
siRNA的
体内是怎样转录的?
答:
体内转录:最近有几个研究小组构建了一些可以在真核细胞内表达
siRNA的
载体,包括被广泛应用的质粒载体和新研发的
转染
效率较高的病毒载体。质粒载体(以Ambion公司提供的Psilencer系列质粒为例)都包含有一个RNA聚合酶Ⅲ(Pol:Ⅲ)启动子和一个45个连续的T构成的转录终止位点以及选择标记,选用Pol:Ⅲ启动...
sirna
nc怎么设计-如何设计有效的
siRNA
答:
Q:
siRNA的
储存液体浓度和工作浓度有何区别? A:siRNA的贮存浓度就是保存的最佳浓度,锐博推荐的贮存液浓度为20μM;而siRNA的工作浓度就是使siRNA能够达到最佳沉默效果的
转染
浓度,一般10~100nM范围内,锐博生物推荐的转染浓度是50nM。 Q:转染时该如何分组?分组的
目的
是什么? [图片上传失败...(image-67e513-16546683...
siRNA转染
后什么时候做蛋白检测最好?
答:
siRNA介导的RNAi属于瞬时现象,不能稳定传代,其作用时间不能维持很久,通常建议在转染后3-4 d内完成检测。
siRNA转染
后最佳检测时间因细胞、
目的
基因而异,多在转染后24-48 h之间检测。一般建议24-48 h检测mRNA水平,48-72 h检测蛋白水平。
siRNA转染
答疑专题总结(下)
答:
瞬时
转染
的
siRNA
会在培养传代过程中,不断被降解稀释,以至消失。如果需要在子代中也永久有RNAi,必需将相关siRNA基因整合到细胞基因组中,并表达。一般来说,如果感染并传代2周以后,RNAi效应仍然非常明显,可以初步认定是稳定的。稳定传代的细胞系根据细胞的不同,可以传很多代的。Q11: NCBI里查到的
目的
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