体内转录：最近有几个研究小组构建了一些可以在真核细胞内表达siRNA的载体，包括被广泛应用的质粒载体和新研发的转染效率较高的病毒载体。质粒载体（以Ambion公司提供的Psilencer系列质粒为例）都包含有一个RNA聚合酶Ⅲ（Pol：Ⅲ）启动子和一个45个连续的T构成的转录终止位点以及选择标记，选用Pol：Ⅲ启动子是因为此启动子总是在距其一定距离的位置起始转录，而遇到45个连续的T就终止转录。
并且终止于转录终止位点第二个碱基处，十分精确。此法需首先化学合成一段编码siRNA正义和反义链的模板，正义与反义序列之间由一段环（loop）序列隔开，插入载体PolⅢ启动子下游，然后转入细胞，环序列可使转录出的RNA链折叠成具发夹结构的小RNA分子，这些小RNA可被细胞内的Dicer切割为长21bp的siRNA，他含有19对互补碱基，3′端各有2个U突出，可引起特定基因沉默。与化学合成及体外酶法合成相比，表达载体是在细胞内通过转录持续产生siRNA，所以可延长siRNA作用时间，目前此法已被广泛应用，具体的技术细节可查看相关产品网站。