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pcr产物做二次pcr
我想克隆一个基因。步骤是:先进行PCR,
PCR产物
纯化回收,然后连接,转化...
答:
你也是老手了,300bp的片段连接也是小意思,基本的问题就不谈了:1,不成功是怎么不成功,假阳性?如果是这样,多挑点(20个)鉴定 2,试试培养基中加1%葡萄糖,以及将片段末端磷酸化试试,都能提高连接和转化效率。我觉得,片段与载体比例不是根本原因,300bp很好连,而且是T载体,就算比例比较夸张...
我做的巢式
PCR
,第一幅图片是我想要的,可是后来成了第二幅图,求高手指点...
答:
如果引物什么的都有依据,体系没问题的话,那么肯定是是模板浓度过高。多稀释一轮
产物
,做个梯度,范围要广
双酶切时,是直接用
pcr产物
就可以,还是需要
答:
1 做转化质粒的时候一般不加连接酶。对
PCR产物
进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为T4连接酶长时间放置在常温下容易活性降低,建议在冰盒中操作。2 对含有AMP-RESISTENCE的质粒涂布时,一般培养基会放置在培养箱中一段时间后才会到感受态中,3对照的设立:为验证双酶切是否成功,可做如下对照:A 酶...
PCR
实验室污染了怎么处理?
答:
A. 实验室进行通风处理,至少
2
周的时间;通风可加速扩增
产物
的消散的速度 B. 使用清水对实验台面、实验室进行清洗;DNA不溶于酒精,使用清水多次擦拭后可消除附在实验台面等的核酸DNA;C. 使用紫外灯进行房间的照射;紫外线及产生的臭氧都有破坏DNA结构的作用 D. 之前使用的灭菌锅使用清水清洗多次,...
PCR
技术扩增4次,当产生16个DNA时,需要消耗30个引物是为什呢?
答:
2
^4=16,DNA是双螺旋,所以是32条。加上
PCR
模版本来就有的一个双螺旋,即32-2=30
用KT205的
PCR
混合体系跑的PCR,怎样才能将DNA回收
产物
连接到载体上,并提...
答:
师弟(妹)你的目的片段是多大的?T载体的容量也是有限的啊。小片段(500bp)以下很容易。你要转化的是大肠杆菌吗?还是其他的什么?感受态是自己制备的还是买的?保存情况如何?我大致的回答你一下吧:胶回收之后做连接(一般都是37度过夜)。之后再跑一次电泳,再回收,然后做转化。关于大肠感受态的...
2%琼脂糖凝胶电泳检测/分离DNA时凝胶的厚度
答:
我不知道你电泳后要做什么后续试验?我
做PCR
电泳是2%琼脂糖,50ml1倍的TBE缓冲液,上样15-20微升,我的DNA大概20-40ng吧,凝胶厚度因模具而异,我目测我做的凝胶厚度大概0.5cm吧,
做配药品,稀释引物,
PCR
实验中,对水的要求要很高么
答:
你真的做实验吗?单次蒸馏水 = 三级水,又叫蒸馏水
二次
蒸馏水 = 二级水,又叫双蒸水 去离子水 = 一级水,是反渗析方法处理的水,当然某些化学实验室也用石英器皿中的三次蒸馏水作为一级水 我们实验室配缓冲溶液和培养基用双蒸水(二级),配一般的酸、碱、盐用三级水,稀释引物、
PCR
之类...
高中生物中的
PCR
技术,怎么用三次复制提取出目的基因呢,给个图解释一...
答:
回答:注意长度,特别是与灰色部分相当的长度!
本人做酵母的基因敲除,为何敲除后
PCR
验证出现两条带?一条野生型,一条...
答:
楼主如果能确定你的酵母都是单倍体且是阳性的,那么检测拷贝数经典的方法是southern blotting楼主应该明白,不懂的话可以追问。创新且简单一点的方法就是realtime
PCR
用DNA作模板,用一个确定的单拷贝基因作对照,原理是拷贝数越多,同样循环扩增出的
产物
应该成倍增长。望采纳,谢谢!
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