本人做酵母的基因敲除，为何敲除后PCR验证出现两条带？一条野生型，一条敲除后的条带。

莫非在单倍体中也存在基因的多拷贝？怎么证明这种设想？不胜感激。

推荐答案 2014-02-26

首先单倍体中是存在基因的多拷贝的。
其次建议楼主检查一下实验，因为即使多拷贝也是都能敲掉的。
楼主如果能确定你的酵母都是单倍体且是阳性的，那么检测拷贝数经典的方法是southern blotting楼主应该明白，不懂的话可以追问。创新且简单一点的方法就是realtime PCR用DNA作模板，用一个确定的单拷贝基因作对照，原理是拷贝数越多，同样循环扩增出的产物应该成倍增长。
望采纳，谢谢！

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第1个回答 2014-11-19

请问你现在问题解决了吗？我也遇到了相同的问题，能加你的QQ吗？谢谢啊

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基因敲除小鼠PCR鉴定的结果分析……求助攻……答：P出来的这些结果很明显的啊,两条带的是杂合体,一条带的是纯合体,看你引物设计时候的情况是怎么样的了,一般情况下,只有一条小的条带的是敲除的纯合体,只有一条大的条带的就是野生型的了.纯合体可以留下来保种或者拿去做实验,杂合体看情况,有需要的话就留着.

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基因右上角的+和-是什么意思?(如图)答：这种表示方法一般用于基因敲除动物，表示某基因是否被敲除。-表示该基因被敲除，+表示该基因未被敲除。-/+表示一条染色体上该基因被敲除，即个体是个杂合子。-/-表示两条染色体上该基因都被敲除，即个体是完全不能表达该基因。+/+就是野生型，没有任何敲除。

基因敲除之后敲除以后的有基因都会会乱码吗答：基因敲除之后敲除以后的基因不会乱码。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。需要基因敲除的可以联系苏州赛业。赛业生物已服务全球...

融合PCR-基因敲除答：电转导入，完成敲除最后的电转步骤至关重要，将这些精心准备的PCR产物片段导入目标菌株，形成一个完整的敲除体系。按照特定的步骤加入表中所示的PCR反应成分，预热、循环和延伸后，将反应混合物冷却至4°C，等待转化后的细胞筛选和鉴定。通过这一系列精心设计的步骤，融合PCR技术与基因敲除完美融合，展示了...

验证基因敲除?答：1、提取转基因小鼠的RNA，以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR。2、对照实验：提取非转基因（野生型）小鼠的RNA，以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR。3、如果对照组能通过PCR获得基因A或基因A的保守区，而实验组无结果，说明在转基因小鼠中发生了基因A的缺失。

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