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pcr产物做二次pcr
你好,做基因
PCR
原液直接测序,有没有做三次重复的必要性?
答:
对于比较重要的实验,一般建议:1、
PCR
时使用高保真酶;2、建议正、反向都测,测通;3、不仅看序列结果,还是要看波形图,看有无点突变和遗漏;4、开始和最后的20个碱基序列,能否可信,一定要看波形图,从而分析是准确判断还是计算机估计的;5、个人认为同一个克隆没有必要测三次,但可以挑1-3个...
请教一下人基因组DNA进行
PCR
后得到的
产物
是什么
答:
PCR
技术是利用DNA双链复制的原理进行的 是将基因的核苷酸序列不断地加以复制,使它的数量呈指数形式增长。所以,PCR技术的
产物
为大量核苷酸序列。
PCR产物
可以直接测序吗
答:
模板DNA 0.1~
2
ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,
PCR 产物
的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸...
PCR产物
测序问题。
答:
PCR 产物
测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子。也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带。如果只是进行
PCR产物
回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了。问题就在于,如果出现双峰或者多峰,这个样品就白送了,什么也结果也没有。特别你现在用的还是简...
PCR产物
可以直接用于连接吗
答:
第三,链接酶之类的如果出现问题,或者某些环节出现错误,你的目的片段与载体没有链接上,那么你还是无法实现表达,给你对应的检测办法是,用你的引物扩增连接完的目的片段,同时链接目的片段之前的质粒做阴性对照,如果发现链接目的片段的质粒无法通过
PCR
得到你的目的片段,那么就是说链接酶可能出现错误。
如何将
PCR产物
用于生物系统进化研究
答:
比如说你通过
pcr
获得了一段某种鸟类的序列,将这段序列测序,然后把测序结果在genebank中和已知其他物种的序列比对,比对结果可以用来画各物种的系统进化树以及计算碱基替代率,计算在进化过程中收到的选择等等等等。
PCR
后的
产物
是单链还是双链
答:
当然是双链。(1)模板高温变性:双连解旋,形成两条单链。(2)低温退火:上下游引物分别与两条单链退火,碱基配对结合。(3)中温延伸:在高温聚合酶的参与下,利用dNTP,从引物最后的碱基开始,进行链的延长,最后形成双链。这是一个循环,N此循环后,也是这样,最终形成双链。
PCR产物
是用胶回收试剂盒还是直接PCR产物纯化试剂盒
答:
如果确定
PCR产物
很纯(没有引物二聚体),完全可以用PCR产物纯化试剂盒。如果PCR产物不是很纯,或者PCR扩增条带比较小,PCR产物前面又有较多引物二聚体时,用胶回收,其余用PCR产物纯化试剂盒。
pcr
纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别:PCR纯化试剂盒:是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只...
做PCR
反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应?
答:
做PCR
反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应 --- 这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。--- 看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的...
连接
产物
能直接
做pcr
吗
答:
能.因为你扩增是必需拿连接
产物做
模板,但是连接产物里既有载体片段,更多的是你的目的产物片段,无论连上与否,均可扩出你的目的片段.当你可以扩增出你的目的片段,但没有任何意义.也就是不能说明你的目的片段是否连到你的载体上.
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