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PCR扩增后没有条带是怎么回事
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第1个回答 2016-12-23
因素很多~是不是忘加东西啦~模板浓度会不会太浓或者不够啊,是不是需要纯化啊~退火温度合不合适啊~是不是要换酶啊~mg离子浓度啊~具体问题具体分析~先跑个温度梯度吧~
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PCR扩增后没有
出现
条带
答:
没有条带说明没有PCR产物,
应该是PCR阶段原料准备处理线遗漏
,建议回忆一下实验过程,重新制备
为什么
做
pcr
结果只有引物二聚体而
没有
目的
条带
呢?
答:
引物二聚体的产生原因是引物的3'端间相互错配扩增形成
,只有引物二聚体没有目的扩增产物原因有以下几点:1)主要需要优化引物设计,使用专业设计软件检查,避免引起二聚体的序列。适当延长引物,可提高引物与模板的结合效率,提高特异性。2)优化反应体系:适当提高退火温度可以有效提高特异性。另外减少循环数...
PCR
跑不出
条带
答:
回答:PCR没有产物的原因可能有: 1)
引物
参数及引物和模板的匹配; 2)模板的质量,可以用其他引物作为阳性对照; 3)反应条件; 4)酶失活; 5)电泳条件; 根据你的说法,引物和PCR条件应该是没有问题的,那么没有条带,是完全是黑的还是很弥散拖着的呢?你应该
考虑一下酶是否失活的问题
,或者是胶的浓度合不...
PCR
结果
没有条带
,都是弥散的,这
是为什么
答:
1,
可能是模板量过高
,降低模板浓度10-1000倍;2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环(也就是在程序中多设置2步);3,稍降Mg离子浓度,如果以前加1.5ul的,试试1-1.2ul;如果以上方案还不能解决,就要检查你的模板、
引物
和...
我做的
pcr
跑完胶完全
没条带怎么回事
?就好像没加DNA似的
答:
非特异性扩增产物。应该优化PCR反应,比如提高退火温度(首选)、减少酶量(首选)、降低镁离子浓度、降低模板浓度、降低
引物
浓度等等。如果不行,还可以重新设计引物,增强引物的特异性。
pcr
开始
有条带
,后来怎样都
没
条带
答:
3. 换Taq酶试试,看看是不是你的酶问题(因为Taq酶的保真性不高),看看能不能P出来,如果能,建议直接换NEB 的 phusion做
PCR
,我用过的PCR酶中,phusion的保真性和
扩增
效率相对其他而言都是最好的。质粒应该更容易扩增出目的片段,你用你的质粒做模板做个梯度PCR看看能不能出有
没有
出目的带的,...
PCR扩增
总是得不到目的
条带
,可能有哪些原因,实验已经做了一个月了,望...
答:
可能模板有问题,可能是模板浓度过高或者循环次数过多所导致;或可能是退火温度不适合,最后就考虑一下
引物
问题
为什么
阳性克隆
pcr
鉴定会有个泳道里
没有条带
答:
可能原因:1.
PCR扩增
的是假克隆,因为PCR验证的可靠性不稳定。2.质粒中酶切位点变异你可以做如下实验:1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大2.用提出的质粒做pcr,这样比较可靠,用细菌做pcr的假阳性极高3.用别的酶再试一下,是否能切出目的片段。祝实验成功 ...
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