为什么做pcr结果只有引物二聚体而没有目的条带呢？

Question

如题所述

Answer 1

引物二聚体的产生原因是引物的3'端间相互错配扩增形成，只有引物二聚体没有目的扩增产物原因有以下几点:
1）主要需要优化引物设计，使用专业设计软件检查，避免引起二聚体的序列。适当延长引物，可提高引物与模板的结合效率，提高特异性。
2）优化反应体系：适当提高退火温度可以有效提高特异性。另外减少循环数、适当降低镁离子工作浓度，也可以提高特异性，但都会导致扩增效率的下降，需要根据具体的实验要求优化合适的条件；或者适当减少引物用量、模板量，过量的模板也会抑制特异性扩增。引物加入量过高也会导致非特异性扩增，引物使用量请参考说明书。
3）优化反应程序：尝试某些特殊的程序，如巢式PCR、Touch Down PCR等。
4）选择热启动酶：与普通PCR酶相比，热启动酶具有更高的扩增效率和特异性。由于普通DNA聚合酶在室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系需要在冰上进行配制，使用热启动酶可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增，有助于得到高特异性的扩增结果。