第1个回答 2013-07-24
实验一、培养基母液的配制一、实验目的 掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前,为了方便和用量准确,常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时,只需按预先计算好的量吸取母液。二、实验原理 培养基是植物细胞、组织和器官吸取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中,需要各种营养物质,这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时,只是切取植物体的一小部分,它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。而自然界的植物千差万别,每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求,没有哪一种培养基能够适用于所有植物。因此,对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。目前对植物进行组培时,人们所使用的培养基只几十种,其中MS培养基应用最为广泛。说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的,它的无机盐含量较高,微量元素种类较全,浓度也较高。三、实验试剂与仪器设备1、药品试剂:母液、蔗糖、卡拉胶(或琼脂)、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2,4-D等。2、仪器设备:电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。四、实验内容(一)母液的配制MS培养基母液方案配制如下表:成分1L母液的用量(mg/L)每升培养基取用量(ml)备注大量元素(20X)NH4NO333000 50 KNO338000 KH2PO43400 MgSO4﹒7H2O7400 CaCl2660050单独配制铁盐(100X)FeSO4.7H2O278010 Na2-EDTA3730 微量元素(200X)KI166 5 H3BO31240 MnSO4.H2O3380 ZnSO4.7H2O1720 Na2MoO4.2H2O50 CuSO4.5H2O5 CoCL2.6H2O5 有机元素(100X)VB110 10 VB650 烟酸50 甘氨酸200 肌酸10000 具体配制步骤如下:1、大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液,按照培养基配方的用量,把各种化合物扩大20倍,用感量为0.01g的扭力天平,分别用50mL烧杯称量,用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水,置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高,60-70℃)。溶解后,在1000mL量筒中,混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中CaCl2单独配制。在加入母液时CaCl2应最后加入,以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中,贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时,配1000mL培养基取此母液50mL。2、微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液,按照培养基配方用量的200倍,用微量0.0001g的电光分析天平,分别用50mL烧杯称量,用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时,每配制1000mL培养基取此母液5mL.3、铁盐母液的配制无机盐中铁盐母液,按照培养基配方用量的100倍,用感量0.01g的扭力分析天平,分别用50mL烧杯称量,用重蒸馏水溶解,混合定容,倒入细口瓶中,每配制1000mL培养基取此母液10mL。4、有机元素的配制无机盐中有机元素母液,按照培养基配方用量的100倍,用感量0.01g的扭力天平,分别用50mL烧杯称量,用重蒸馏水溶解,混合定容,倒入细口瓶中,每配制1000mL培养基取此母液10mL。五、实验结果经过大家的集体分工,很快就配制好了母液。母液澄清,无沉淀,说明配制成功,可以储存起来。六、注意事项1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀,如Ca2+和S042-,Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后,会产生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4、药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解,然后依次混合。5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液,其中维生素 氨基酸类可以分别配制,也可以混在一起。5、母液配好后放入冰箱内低温保存,用时再按比例稀释。 实验二、培养基的配制与灭菌一、各培养基配制1、香蕉培养基:诱导培养基:MS+BA 3.0 mg/L继代培养基: MS+BA 3.0 mg/L 生根培养基: MS+NAA0.5mg/L 2、 烟草叶片培养基:诱导培养基: MS+BA 1.0 mg/L继代培养基: MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L生根培养基: MS+NAA 0.2 mg/L 3、柱花草培养基叶片愈伤组织诱导培养基: M S+BA4mg/L+NAA1.0mg/ml继代培养基:M S+ BA4 mg/L+ NAA0.01mg/ml芽伸长培养基:M S+BA0.4+ NAA 0. 1mg/ml 4、木薯外植体培养基:诱导培养基:MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L继代培养基:MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L生根培养基:MS + NAA 0.02 mg/L 5、桉树外植体培养基:芽的诱导培养基:1/2 MS+BA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L芽的增殖培养基:MS+BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L生根培养基: 1/2 MS+NAA 0.2 mg/L 6、花生胚培养基:1/2 MS 7、玉米胚培养基:1/2 MS 8、水稻盾片培养基:水稻发芽培养基:MS诱导培养基:MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L分化培养基:MS+BA 2.0 mg/L生根培养基:MS+NAA 1.5 mg/L 9、自选材料—芦荟培养基芽诱导培养基: MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L继代增殖培养基:MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L生根培养的培养基配:1/2MS+NAA0.1mg/L 二、培养基的配制及消毒:(1)按照MS培养基的配方(以配制1LMS培养基为例)取大烧杯加入先前配制好的母液其中包括:大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐10ml、有机元素10ml,最后加钙盐50ml充分混匀。再加入30g食用白糖,加入适量的去离子水使总量将近1L,混匀后调PH值(调至5.8-6.2),用1000ml量筒定容,最后向培养基中添加8.0g卡拉胶混匀。注意事项:1配制MS时,钙盐一定要最后加入;2调好PH值后再加卡拉胶(或琼脂)。(2)培养基配制好后分装到培养瓶中每瓶约30ml,盖好瓶盖帖上标签。需要加入激素的培养基在定容到1000ml后加入所需的激素。混匀后调PH值(调至5.8-6.2),用1000ml容量瓶定容,最后向培养基中添加8g卡拉胶,混匀后进行分装,然后装入高温高压灭菌锅进行灭菌(一般培养基用0.1MPa,121.5℃,15~30分钟可达到彻底灭菌的目的)。灭菌好后取出冷却备用。(3)培养环境条件:培养温度为28(-1、+1)℃,光照强度2000—3000LX,光照时间为12h/d,每隔7天观察一次。 三、超净操作台的消毒消毒时先用75%的酒精对超净台的各处进行消毒,点燃酒精灯放于超净台右侧,再对实验工具进行灼烧灭菌,后放于架上冷却待用。并依次将实验中所用培养基瓶及所需试剂瓶进行消毒,置于超净台左侧,注意实验中要用75%的酒精对手进行消毒。 其实你应该把邮箱留下,这样给你发更好