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细胞增殖后转染的sirna会起作用吗
如题所述
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推荐答案 2019-08-28
siRNA在细胞内是有一定时限的,因为RNA都有
半衰期
且不能进行复制扩增。
在
细胞增殖
后,细胞内的siRNA不但会相对减少,还会被细胞降解掉。所以你最好在转染后24-72小时内进行实验。细胞增殖特别快的话,就接近于24小时收,细胞增殖慢的话,就可以稍微晚点收。
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siRNA的
筛选求教
答:
1) RNA水平的检测:采用qPCR检测方法,
siRNA转染
后24~72 h即可检测到 mRNA表达明显降低;2) 蛋白水平的检测: 主要为Western Blot方法检测, 检测时间受细胞内蛋白 质表达量、 半衰期等因素的影响, 一般为48~96 h;3) 功能筛选: 应用EdU
细胞增殖
、EdUTP细胞凋亡等方法进行细胞功能筛选。
细胞
污染会影响
sirna转染
效率吗
答:
在细胞增殖后,
细胞内的siRNA不但会相对减少,还会被细胞降解掉
。所以你最好在转染后24-72小时内进行实验。细胞增殖特别快的话,就接近于24小时收,细胞增殖慢的话,就可以稍微晚点收。
怎样根据
sirna
确定其特异性
答:
3,通过siRNA引起的其他生物学变化来检测:某些
siRNA作用
于靶基因,会引起
细胞的
调亡和增殖变化,这个时候,可以通过关于调亡和
增殖的
变化来看RNAi
的效果
。希望能对您的问题有所帮助。
小胶质
细胞转染sirna
效率高吗
答:
三到五小时。
siRNA
(Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。
SiRNA
是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
siRNAsiRNA
是什么
答:
4、siRNA在RNA沉寂通道中起中心
作用
,是对特定信使RNA(mRNA)进行降解的指导要素。5、siRNA是RNAi途径中的中间产物,是RNAi发挥效应所必需的因子。6、
siRNA的
形成主要由Dicer和Rde-1调控完成。7、由于RNA 病毒入侵、转座子转录、基因组中反向重复序列转录等原因,
细胞
中出现了dsRNA,Rde-1(RNAi缺陷基因-1...
真核质粒
转染
与脂质体转染有什么不同?
答:
两种转染方法在功能上是一致的。但是
siRNA转染
以后发挥
作用
的时间较短,用于短期抑制试验(一般维持一周以内)。而因为质粒存在于
细胞
内比较稳定(载体上含有抗生素标记,可以筛选),能够持续表达产生shRNA,然后不断产生新
的siRNA
,因此维持作用的时间长(可以超过两周)。另外用质粒还可以同时转入报告基因...
细胞转染的
操作方法?
答:
常用试剂:例如聚合物如聚乙烯亚胺PEI、聚-L-赖氨酸PLL、聚-L-半胱氨酸PLC;阳离子表面活性剂。操作步骤:将
转染
试剂与目标分子(如质粒DNA、
siRNA
等)混合,形成载体-目标分子复合物。将该复合物加入包含目标
细胞的
培养基中,使其与细胞发生相互
作用
,从而导入目标分子。2、电穿孔法转染 使用电场脉冲使...
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siRNA转染
实验(上)
答:
转染前,
细胞
融合率的理想范围应在30%至60%,过高或过低可能影响
转染效果
。同时,通过设置荧光标记
的siRNA
阴性对照,可以更准确地评估转染效率,确保实验的可靠性和可重复性。结论与建议
siRNA转染
实验需要细致的操作和精确的参数调控。通过理解RNAi的基本原理,优化储存和溶解步骤,以及选择和调整转染条件,...
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