RNA干扰机制与siRNA的沉默力量
RNA干扰（RNAi）是一种自然发生的生物学现象，通过胞质中的Dicer核酸内切酶将双链RNA分解为21-25个核苷酸的siRNA分子。这些siRNA与RISC复合物结合，形成特异性的沉默机制，能够精准切割外源基因的mRNA，从而实现基因表达的抑制，对于病毒病、遗传疾病和肿瘤研究具有深远影响。
siRNA的储存与溶解艺术
常规化学合成的siRNA，以21-23nt的双链形式提供，冻干形式的即用试剂可以稳定保存在-20℃至-80℃长达一年。使用时，需将siRNA粉末短暂离心，然后用DEPC-DW或无菌水溶解。推荐使用100pmole/μl浓度长期储存，超过2个月需置于-70°C以保持最佳效果，但需注意冻融次数不宜超过五次。
转染策略的优化路径
选择适合的转染试剂至关重要，需预先与厂家沟通并参考相关文献，确保细胞类型适用。siRNA的浓度选择范围广泛，1-100nM，通过梯度实验找到最适合细胞系的浓度，这将决定转染效率、细胞毒性及基因沉默效果。
转染前，细胞融合率的理想范围应在30%至60%，过高或过低可能影响转染效果。同时，通过设置荧光标记的siRNA阴性对照，可以更准确地评估转染效率，确保实验的可靠性和可重复性。
结论与建议
siRNA转染实验需要细致的操作和精确的参数调控。通过理解RNAi的基本原理，优化储存和溶解步骤，以及选择和调整转染条件，科学家们能更好地利用siRNA这一强大的研究工具，揭示基因功能的秘密，为疾病治疗带来新的可能。