怎样优化sirna和转染试剂的用量

如题所述

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第1个回答 2018-08-14

我们实验室用的常州一家RFectPM原代细胞小核酸转染试剂，是专门针对原代细胞和悬浮细胞小核酸转染的试剂。做了几次实验，这款试剂转染性能很好，细胞死的比较少，确实不错的。

第2个回答 2017-07-08

厂家推荐的体积,是维持ip2000 1uL + 培养基 50uL这个比例.这个只是个参考,或者起始比列. 在实际操作当中,你可以同时试一下增高,减小这个比例.看看哪个效果最好,以后就用你试的那个比例.本回答被提问者采纳

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悬浮细胞转染步骤及优化注意事项答：1. 优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2. 同时细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。转染细胞用的质粒必须保证无菌。分享一个小秘诀：将提完质粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，这样就除菌了。3. 转染用的质粒首先要保证数量，一般为...

siRNA转染效率不理想的原因(1)答：由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。2. 细胞密度不佳调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很...

干货分享 | siRNA转染实验(上)答：转染策略的优化路径选择适合的转染试剂至关重要，需预先与厂家沟通并参考相关文献，确保细胞类型适用。siRNA的浓度选择范围广泛，1-100nM，通过梯度实验找到最适合细胞系的浓度，这将决定转染效率、细胞毒性及基因沉默效果。转染前，细胞融合率的理想范围应在30%至60%，过高或过低可能影响转染效果。同时，通...

siRNA在转染实验过程需要注意哪些事项?答：E.选择合适的转染试剂：针对siRNA制备方法以及靶细胞类型的不同，选择好的转染试剂和优化的操作对siRNA实验的成功至关重要。F.通过合适的阳性对照优化转染和检测条件：对大多数细胞，看家基因是较好的阳性对照。将不同浓度的阳性对照的siRNA转入靶细胞（同样适合实验靶siRNA），转染48h后统计对照蛋白或mRNA...

hela细胞siRNA转染条件?包括密度,siRNA以及转染试剂用量比例,详细一些...答：SIRNA做过hela细胞的转染,用的24孔培养板，将siRNA 稀释液与试剂稀释液混合，细胞铺板密度在45%左右。设置siRNA浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度最好做2个复孔，转染前一天铺板，稀释siRNA和转染试剂的培养基必须是无血清培养基，血清的存在会干扰siRNA与转染试剂的混合，影响转染效率 ...

sirnanc怎么设计-如何设计有效的siRNA答：A:1)对于贴壁细胞,推荐采用转染试剂转染即可;2)对于难转染的细胞的转染,如何提高转染效率的问题也是目前研究的技术难题。一般建议使用电转的方法,但是由于电转的方法对细胞损伤比较大,该方法也未必是最佳的。转染效率的确定,常用的是使用荧光标记的siRNA,通过荧光显微镜,共聚焦显微镜,流式细胞仪检测的方法。具体可以...

RFect 小核酸转染试剂步骤答：否则会导致细胞死亡； 首次实验 siRNA 的用量设置在终浓度 10nM、30nM、50nM、100 nM 进行摸索，后续实验根据实验结果修改。转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24 孔培养板，整调整 siRNA 与 与 RFect 试剂的用量 。

怎么提高NIH 3T3 细胞转染效率答：细胞，差不多也就这几项。转染效率低要先排除一下是否是siRNA的问题，如果siRNA无效，换再好的转染试剂也白搭，可以用带荧光标记的control siRNA做一下看看，转进去的话会有荧光的。确实转染效率低，可以考虑换转染试剂，RFect小核酸转染试剂可以试试，据说专门针对难转染细胞的，普通细胞效果更好。

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