用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，有四个切点怎么切出来的啊

Question

只使用EcoR I，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生

质粒和目的基因自身连接物，而利用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时，不会产生自身连接产物。

Answer 1

BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，在质粒上可以形成BamH Ⅰ和Hind Ⅲ的粘性末端，面外源DNA上，左边剩下的是BamH Ⅰ的粘性末端，右边是和Hind Ⅲ的粘性末端，这样就可以形成两种不同的粘性末端，在质粒上的两个切口彼此不同，在目的基因两侧的两个切口彼此不同，而且还可以使目的基因接到质粒上。追问

那么他切掉了的东西就不要了吗

追答

应该就不要了，基因工程中这一步重要的是将目的基因连接到运载体上。

Answer 2

1. 切前0, 切后2 (双螺旋结构,切口两边各有一个游离磷酸基团 2. 越高Ⅰ和Hind Ⅲ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时

Answer 3

BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，在质粒上可以形成BamH Ⅰ和Hind Ⅲ的粘性末端，而在外源DNA上，左边剩下的是BamH Ⅰ的粘性末端，右边是和Hind Ⅲ的粘性末端，这样就可以形成两种不同的粘性末端，在质粒上的两个切口彼此不同，在目的基因两侧的两个切口彼此不同，它们就不会自己连在一起了。而且还可以使目的基因接到质粒上。