质粒，目的基因酶切后分离纯化再连接，是指酶切液经过一系列处理后连接还是指跑过电泳的凝胶块进行连接啊

如题所述

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推荐答案 2011-09-29

质粒，目的基因酶切后，酶切液琼脂糖凝胶电泳，将含目的条带的凝胶切下来，进行胶回收，然后再在连接酶的作用下，4度和16度都可以（看你的目的基因的情况决定），将目的基因与目标质粒连接在一起。追问

跑电泳不是用一点酶切液吗，那剩下的酶切液怎么做，不用岂不是浪费啊

追答

不是用一点，是全部点样。用一个大一点的梳子，把样品全部点进去。

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第1个回答 2011-09-29

先将酶切产物进行电泳，割下电泳条带，用凝胶回收处理试剂盒回收DNA（这个也可称为纯化），然后用T4连接酶将回收好的DNA与质粒进行连接，重组质粒就构建好了

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1、为什么质粒酶切产物需要电泳后再胶回收,而不是直接进行酶连答：3、提高酶连效率：经过电泳和胶回收纯化的DNA片段具有更高的纯度和浓度，这样可以提高酶连反应的效率，使连接更加准确和有效。

一个质粒和一个目的基因,上面都有两种酶的切割位点,为什么用一种酶切...答：单酶切来做连接无法选择目的片断插入的方向，插入产物有正反向两种。单酶切载体也很容易产生自连（所以单酶切为了防止自连常用ciap处理）不同酶的双酶切做连接可以保证插入方向性，也能防止自连，理论产物只有一种

质粒和目的基因片段分别双酶切(bamh1,xba1)连接后电转感受态细胞,同时...答：质粒是双酶切后，加连接酶的生长表示双酶切不完全，未加连接酶生长表示你用的没能完全酶切你的质粒，最好加连接酶对照也做吧

DNA酶切后电泳,条带呈复带的原因答：那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染，一开始跑胶的时候看不出来，后来你回收浓缩再加上酶切，再跑电泳的时候就出现了两条极近的带。其实将这两条带回收（上面那条是目的条带的可能性要大些），进行连接，只要操作和实验条件好的话，菌落的阳性率也挺高的，因为是双酶切连接。

为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切...答：酶切应该采用同一种限制性内切酶，质粒和基因经过酶切后会发生自由组合，产生3中后代：（1）酶切后的目的基因间连接（2）酶切后的质粒间连接（3）目的基因和质粒连接，形成重组体酶切图示无非是粘性末端或者平端连接两种连接的方法，建议你去参考分子生物学。等级不够没法贴图，抱歉 ...

目标片段和质粒酶切后连接之前需要胶回收吗答：因为粘性末端的碱基互补），会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法纯化，可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想，是否酶切完全，胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段（包括完整的环状质粒和线性质粒）等等。

两个酶切后是不是只有目的基因与质粒连,也就是不用再筛选了?答：非也！目的与目的连，质粒与质粒连的情况同样会发生。一定要筛选！

目的基因酶切后电泳图怎么看高中选修三的问题谢谢各位了答：一般单酶切之后，此时的情况类似于开环结构，显示的是整个质粒的全长，此时对于maker去比对即可。2、双酶切位点情况这类情况被双酶切之后，产物里面有两个片段分布，一个大片段，一个小片段，从琼脂糖凝胶电泳中看，前为小片段，后为大片段。我们再根据目的片段和质粒的实际长度对比切割后各自的长度...

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