请问做液相色谱时在什么样的情况下必须进行梯度洗脱?这跟流动相的种类有无关系?

如题所述

讨论这个问题,必须要先讨论等度洗脱和梯度洗脱相比:
等度洗脱优点是流动相比例不随时间进行变化,这样,能最大限度保证压力稳定,基线平直,在连续进样时,可随时停止,如果上一针有没有跑出来的峰,下一针也能直接看到,不会漏检峰,还有就是在一般性外标或内标时,当样品出峰较晚时,可采用简单方法极快检测。举例:假如主峰在10分钟出峰(无其它干扰峰),你正常进一针,然后等两三分钟再进一针,再等两三分钟进一针,这样一共运行20分钟就出了三个峰,这样的方法对标准样和样品的检测时,能极大缩短时间。而此方法用梯度是不可行的。所以等度洗脱在内外标时作用最大。
梯度洗脱是等度的辅助,但这些年一般的归一化检测已经取代了等度。主要是因为,等度洗脱如果出峰较多时,就会使各峰峰宽出现前窄后宽,积分上也有歧视现象,还有就是等度洗脱有的出峰过早有的过晚,还有的两峰相隔过宽或过窄,这时,梯度的作用就非常明显了。它可以把出峰过早的峰用低有机相-高水相向后拖动,便于分离,还能把后面出峰较晚的峰用高有机相-低水相提前跑出来。这样的好处不仅能节约时间,还能使各峰峰型都比较窄,积分更准了。
用梯度和等度与流动相也有一定关系。比如正相色谱时是不能用梯度的,在反相色谱时,等度,梯度都可以使用。
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第1个回答  2013-07-31
这个我真的不知道。。
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