一、试剂准备
溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）。1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。在121℃高压灭菌15min ，贮存于4℃。1M Tris-HCl（Tris(三羟甲基)氨基甲烷）：800ml H2O中溶解121g Tris碱，用浓盐酸（约42ml）调pH值，混匀后加水到1L；0.5M EDTA（乙二胺四乙酸）：700ml H2O中溶解186.1gNa2EDTA.2H2O，用NaOH(约20g)调pH8.0，补H2O到1L。 2. 溶液Ⅱ：0.4M NaOH，2% SDS，分开配置。
3. 溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。5M KAc 300ml，冰醋酸57.5ml，加ddH2O至500ml。4℃保存备用。
4. 无水乙醇；
5. 70%乙醇；
6. RNA酶A母液：将RNA酶A溶于10mmol/L Tris·Cl(pH7.5), 15mmol/L NaCl中，配成10mg/ml的溶液，于100℃加热15分钟，使混有的DNA酶失活。冷却后用1.5ml eppendorf管分装成小份保存于-20℃。
7。灭菌双蒸水ddH2O
二、质粒提取操作步骤
1. 挑取LB固体培养基上生长的单菌落，接种于2 ml LB（含抗生素）液体培养基中，37℃、250rmp振荡培养过夜（约12-14hr）。
2. 取1.5ml培养液倒入1.5ml eppendorf管中，12000rmp离心1min。弃上清液。
3、菌体沉淀重悬浮于200μl溶液Ⅰ中(需剧烈振荡，使菌体分散混匀）。
4、加入2% SDS 100μl，盖紧管口，混匀，然后加入0.4M NaOH 100μl快速温和颠倒
eppendorf管数次，以混匀内容物(千万不要振荡)。 5、加入280μl预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，将管温和颠倒数次混匀，见白色絮状沉淀。12000rmp离心10min。
6、取600μl上清液移入加有600μl无水乙醇的eppendorf管，颠倒数次混匀, 12000rmp离心
10min。（先加无水乙醇，后加上清液）
7、弃上清，加入1ml 70％乙醇，颠倒数次，然后直接倒掉乙醇，不需要离心。
8、将管倒置于卫生纸上使液体流尽，室温干燥30分钟。
9、将沉淀溶于50μl TE缓冲液(pH8.0) 或灭菌双蒸水ddH2O（含20μg /ml RnaseA，
约4μl）中，37℃水浴30min
或者室温放置过夜以降解
RNA分子，然后储于-20℃冰箱中。
该质粒提取方法来源于UCLA的林辰涛教授实验室