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转染sirna多长时间后检测蛋白表达
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第1个回答 2016-09-23
新的实验研究推荐做梯度取样以及检测。
这种预实验对后续研究有很多帮助。
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siRNA转染
效率不理想的原因(1)
答：
由于siRNA沉默时效性的影响，转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测，
转染后48-72小时才能进行蛋白检测
。如果转染时铺板密度较高，细胞一方面转染效果不理想，直接影响沉默效果和数据可靠性，另一方面，48小时甚至更长时间后，沉默检测最佳点时，过于密集的细胞将影响细胞状态，从而影响实验结果。更多关于RNA转染...
怎样根据
sirna
确定其特异性
答：
一般在 siRNA 转染后 24~72h 即可以检测到靶 mRNA 水平的降低
。检测方法一般采用 Real-time PCR 定量检测。2，蛋白水平的检测：一般需要借助抗体(针对靶基因蛋白质的抗体或针对融合蛋白的抗体)或报告基因系统检测，检测手段一般有 Western-blot、免疫组化等。一般说来，检测时间受细胞内蛋白质表达量、蛋...
siRNA转染后什么时候
做
检测
最好
答：
36-48小时
转染sirna后
做q-pcr 做出来结果没区别怎么办
答：
在mRNA水平下降后，接下来才会有蛋白水平的下降，一般来说，转染后
48-72小时
进行蛋白检测通常会得到较好的结果 EntransterTM-R4000是英格恩生物（Engreen Biosystem）最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA，而且针对mRNA等长...
siRNA转染
后目的基因未被干扰,该怎么办
答：
1、转染效率的问题。虽然
siRNA
可以转入细胞内，但是由于转染效率低，进入细胞的siRNA太少，无法发挥正常功能。2、
检测时间
点。 建议
转染后
24-48 h检测基因水平变化，48-72 h
检测蛋白
水平变化。3、推荐RT-PCR的引物应该设计在target位置的两侧，而不是同侧。4、RNA降解，建议-20℃保存，溶解后要最小量...
求助!!吸血虫细胞
转染
用什么转染试剂转染效率高!!
答：
能数清荧光个数，转染效率很低了，但是有些细胞自身很难转。一般
转染后
6小时就可以观察荧光了，如果
时间
间隔太长，会导致了荧光淬灭。我们实验室在做完RFect
siRNA转染
后基本选择48h小时后用mRNA水平
检测
。楼主可以在48h小时后用mRNA水平检测，或者72h
后蛋白
水平检测，毕竟观察荧光效果只能作为一个参考。
3T3
转染
问题
答：
我们实验室在做完RFect
siRNA转染
后基本选择48h小时后用mRNA水平
检测
，另外你用的什么转染试剂？如果转进去不表达你怎么能够看见？建议你多找几个细胞系，选取阳性Control质粒进行转染，一般脂质体转染6小时后就有
蛋白表达
了，EGFP的质粒很多人都在36小时左右观察，你可以从10～72小时分
时间
点观察。
siRNA转染
时细胞铺板密度为什么很重要?
答：
由于siRNA沉默时效性的影响，转染后48小时才能进行进行qRT-pcr检测，转染后
48-72小时
才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高，细胞一方面转染效果不理想，直接影响沉默效果和数据可靠性，另一方面，48小时甚至更长时间后，沉默检测最佳点时，过于密集的细胞将影响细胞状态，从而影响实验结果。RNA转染试剂En...
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