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转染后24小时提蛋白
siRNA
转染后
什么时候做
蛋白
检测最好?
答:
siRNA转染后最佳检测时间因细胞、目的基因而异,多在转染后24-48 h之间检测。
一般建议24-48 h检测mRNA水平,48-72 h检测蛋白水平
。
瞬转后想验证一下质粒,一般
转染
多久可以提
答:
回答:
24h
到48h~一般48h
蛋白
表达量会达到峰值~但需要根据具体细胞来定~
转录水平和
蛋白
水平检测选择时间
答:
48到72
小时
之间。siRNA
转染后
(entranster)在mRNA转录水平下降后,接下来才会有
蛋白
水平的下降,转染后48到72小时之间进行蛋白检测通常会得到较好的结果。
c细胞
转染后
72
小时后提蛋白
可以吗
答:
瞬时
转染后
48
小时
内外源基因表达到顶。48小时就行
质粒,一般
转染
多久可以
提蛋白
答:
真核细胞
转染
么?一般转染48h后目的
蛋白
表达量达到峰值~单根据具体细胞而定~原核细胞体外表达一般是16度过夜诱导~
CHO细胞
转染后24h
后1:4传代,出现小白点,是染菌了吗?
答:
可以传代。转染分2种,一种是瞬时转染,即
转染后
让细胞表达目的蛋白后即
提取蛋白
,提一次蛋白,转染一次,这种方式一般不传代;另一种转染为稳定转染,转染后加入一定选择压力进行筛选,没有转染的细胞不能存活,只留下转染的细胞,这种情况下可以筛选单个转染细胞,构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系...
转染
6孔板后,怎么收集我的细胞,然后
提蛋白
答:
转染
6孔板后,一般长到十的六次方级别就可以
提蛋白
了 可以用移液器将细胞吸出来并高速离心,沉淀重悬于PBS中洗涤,接着就可以裂解
提取蛋白
了。可以用超声,酶解等等,裂解后离心收集上清。
293T细胞为什么经常用于
转染
,
蛋白质
表达
答:
经改造后在其中插入了T抗原,因此用293T细胞做
转染
可以获得较高的表达水平。293T细胞也可以作为普通的哺乳细胞用于筛选稳定表达的细胞系,不过它贴壁性差,容易脱落,不利于筛选。3T3细胞是小鼠胚胎成纤维细胞系,它具有明显的接触抑制作用,所以易于识别已发生转化的细胞。293细胞是人肾上皮细胞系,有多种...
可以往一个细胞内
转染
两次吗
答:
这个可以的 如果是用Lipofectamine 2000,可以先转siRNA,等
24h
后再转表达蛋白的质粒 一般siRNA可以72h,蛋白48h足够了,这样时间比较好 而且siRNA
转染
细胞要求密度不太高,这样长得第二天正好转表达
蛋白质
质粒
细胞培养及
转染
Protocol
答:
然后将上述混合物均匀的加入到细胞中。(4) 在37℃,5%CO2,100%饱和湿度中保温6小时,每个培养皿各加入12ml新鲜含10%FBS的DMEM培养液,继续培养。
24小时
后用新鲜含10%FBS的DMEM培养液替换原先的旧培养基,继续培养。
转染24h后
可提RNA,转染48小时后可
提蛋白
和RNA。293T细胞培养及转染Protocol ...
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