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sirna转染效率怎么看
如何
选取合适的细胞进行
sirna
和pcdna
答:
siRNA细胞
内定限RNA都半衰期且能进行复制扩增 细胞增殖细胞内siRNA相减少细胞降解掉所
转染
24-72内进行实验细胞增殖特别快接近于24收细胞增殖慢稍微晚点收
sirna转染
后要过多久才能抑制表达
答:
三到五小时。
siRNA
(Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。
SiRNA
是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
细胞
转染
为什么不能加血清
答:
传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的 磷酸基团 形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响
转染效率
。另外,使用脂质...
转染
后,细胞发生死亡
怎么
回事
答:
可能有多种原因:目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染
试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;细胞贴壁转染之后没有正常换液。建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行...
不同
转染
试剂为什么会有强弱表达的差别
答:
和传统 转染方法相比区别在于,传统方法需要提前一 天接种铺板,培养24 小时后等细胞到一定汇 合度再加转染复合物转染;而反向转染则是不 用预先接种细胞,先加入转染试剂和
siRNA
混合物在培养板上共同温育,然后再加入细胞 铺板,培养。这个方法的好处不单是可以节约 一整天的时间,而且
转染效率
高。
如何
做环状RNA的功能验证
答:
基于circRNA侧翼Alu序列特征,PCR扩增含侧翼Alu序列的目标DNA序列,随后依据对应限制性内切酶位点进行酶切,进而连接pEGFP-C1载体。连接载体进而转染对应细胞样本,定量PCR检测
转染效率
。基于divergent primer验证circRNA过表达倍数。过表达策略:1. 扩增目标区域包含circRNA侧翼Alu序列或内部碱基互补序列,侧翼上下游...
细胞
转染
的操作方法?
答:
置于电穿孔仪的电穿孔室中。施加特定的电脉冲,使细胞膜电穿孔,从而实现目标分子的导入。不同细胞类型和转染试剂之间的适用性和效果可能会有所差异。因此,在进行细胞转染实验时,需根据具体实验目的、细胞类型和目标分子的特性选择合适的转染方法,并优化实验条件以提高
转染效率
和细胞存活率。
siRNA转染
后什么时候做检测最好
答:
36-48小时
细胞
转染
,为什么有许多孔的细胞死了?
答:
细胞
转染
后,出现大量死亡现象的原因有:1、细胞状态欠佳,需调整细胞生长状态:一般处于良好生长状态的细胞对转染试剂有更好的耐受性。2、
siRNA
或者转染试剂浓度过高。3、转染试剂毒性较大,更换转染试剂。4、siRNA纯度低,杂质影响细胞状态。5、转染时间过长,转染后未及时更换新鲜培养基。
小核酸
转染
试剂细胞毒性极低?
答:
转染实验优化: 为了提高
转染效率
,建议对转染条件进行优化,特别是首次使用。例如:24孔培养板,调整
siRNA
与RFect试剂的用量。siRNA 用量在0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之间调整,RFect试剂用量在1.0 - 3.0μl之间调整。客户可按照习惯用量进行预实验,如实验结果不理想,可...
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