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pcr没有条带
为什么阳性克隆
pcr
鉴定会有个泳道里
没有条带
答:
可能原因:1.
PCR
扩增的是假克隆,因为PCR验证的可靠性不稳定。2.质粒中酶切位点变异你可以做如下实验:1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大2.用提出的质粒做
pcr
,这样比较可靠,用细菌做pcr的假阳性极高3.用别的酶再试一下,是否能切出目的片段。祝实验成功 ...
为什么
PCR
有时有条带有时
没有条带
答:
复性45 s ,72 ℃延伸90 s ,30 个循环后,72 ℃延伸10 min ,4 ℃保存。每次
PCR
反应均设不含模板DNA 的空 白对照。扩增产物以112 %琼脂糖凝胶电泳分离,溴化乙锭染色,在BioRad2 Gel2700 TM 凝胶成像系统下观察 并拍照记录。3. 数据处理 将RAPD 电泳谱带位点上有扩增位点的记为1 ,无扩增位点...
PCR
跑不出
条带
是什么原因
答:
先解决阳性对照再考虑你的目的基因。阳性对照都
没有
的可能性有两种,阳性对照模板有问题,
pcr
体系的问题(包括引物的问题)。看你的内参下面没有引物二聚体,那后面泳道里最下面的那一道就是引物二聚体了。pcr失败的原因太多了,试剂有问题,或者条件有问题,第一次用一个引物,建议做梯度 ...
PCR
跑不出
条带
只有拖带
答:
PCR
跑不出条带建议重新设计引物,
没有条带
说明实验步骤有问题,建议参考文献做实验。
PCR
时,跑了8个样本,有5个
有条带
,另外3个
没有
,可能有哪些原因造成?
答:
如果八个样品是同一个物种同一对引物,
PCR
试剂也用的是一样的,那么可能是模板浓度过高或者过低,降解,或者是模板中杂质过多,或者是模板被污染(抑制剂,或者提DNA有东西没除干净,或者外来污染),或者是DNA没提好(片段被打碎,质量差等等),或者是反应条件不是最优条件,质量稍差的模板难扩出来 ...
pcr
时p不出来
条带
是怎么回事
答:
普通
PCR
的话有很多影响因素.比如说酶,退火温度,引物设计,变性温度等很多问题.首先说你的模板是不是很复杂,需不需要加入额外的GC enhancer,或者提高预变性的温度.在者,你的退火温度是否合适,一般会选择引物Tm值-5度左右,不行的话可以做一个梯度PCR.然后不你的酶是不是合适,长片段的要长片段的酶,高...
PCR
产物电泳时
没有
明显的
条带
,但有拖尾,maker无拖尾。反映体系如下...
答:
你的
PCR
反应体系中
没有
加MgCl2吗?Mg2+在PCR反应中发挥了重要作用,Mg2+浓度越高,Taq酶活性越强,
条带
越亮,但非特异性也较强,杂带越多;Mg2+浓度过低则影响PCR扩增产量,甚至使PCR扩增失败而没有扩增条带。那个拖尾可能是引物二聚体
基因的
PCR
扩增实验扩增不出DNA
条带
是什么原因?
答:
可能有很多原因,最常见的原因是1.模板不干净,2.引物设计不当,3.退火温度过高,等等
提取细菌DNA检测到
有条带
,
PCR
后无条带;而基因组DNA检测到无条带的,P...
答:
可能细菌DNA浓度太高,影响
PCR
扩增,可以将模板稀释,然后扩增;基因组DNA的
条带
电泳是
没有
,可能是浓度较低,检测不到,但是达到了扩增的模板要求,所以可以扩增出条带,另一个可能是PCR过程中的试剂包括水有污染,所以出现阳性结果。
在做
PCR
实验时为什么总是P不出
条带
?
答:
情况比较复杂,你得确认1.你的RNA没问题,
没有
被降解,cDNA合成没问题。可以用该材料的actin引物做
PCR
检测试试。2你P的基因如果是已知序列,那么设计引物应该很简单,如果是未知的,那么兼并引物没P出东西来是有可能的。若是根据已知序列设计的引物而没有P出产物那就是你PCR体系或者Tm有问题了,试试...
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