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载体抗性和筛选标记
利用质粒抗生素
筛选标记
进行转化子筛选的机理
答:
大多数质粒
载体
都是用抗菌素
抗性标记
,包括氨苄青霉素抗性(Ampr)、卡那霉素抗性(Kanr)、四环素抗性(Tetr)、链霉素抗性(Strr)和氯霉素抗性(Cmlr))等。 i)氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)是青霉素的衍生物,通过干扰细菌细胞壁合成的末端反应,杀死生长的细菌。细菌质粒Amp r基因编码b-内酰胺酶,特异地切割氨苄青霉素的b-内酰...
载体
上的
抗性
基因有利于
筛选
含重组DNA的细胞
答:
如果在一个
载体
上有
抗性
基因,那么这个抗性基因就是
标记
基因,有助于
筛选
含重组DNA的细胞。举个例子,如果在载体上有抗青霉素的基因,那么,如果将目的基因加到这个载体上导入受体细胞后,那么,这个受体细胞就能在含有青霉素的培养基上生长,而不含有这个载体的细胞就不能在含青霉素的培养基上生长,这不就...
质粒的
筛选标记
有哪些用途?
答:
筛选标记
主要用来区别重组质粒与非重组质粒,当一个外源DNA片段插入到一个质粒
载体
上时,可通过该标记来筛选插入了外源片段的质粒,即重组质粒。(1)α-互补:是根据载体的遗传特征筛选重组子,使用的载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(emphasis:role=italiclacZemphasis)的...
怎样检验
载体
是否进入受体细胞?老师讲的是
标记
基因,具体步骤是什么...
答:
最常用的是
抗性筛选
:
载体
上具有某种或某几种抗生素抗性基因,转化之后涂布在含有该抗生素的平板上,能长的就是载体进入了的细胞。挑选之后可以再利用菌落PCR或者扩增之后酶切,以鉴定目的基因是否也重组进去了,以排除载体自连的空载。最后用测序的方法检测是否有突变产生。还有蓝白班筛选:目的基因重组的位...
一文解读:质粒
载体及
各个组成元件
答:
在质粒的元件设计中,pcDNA3.1图谱为我们揭示了关键区域:复制起点、
筛选标记
(如AmpR、KanR,抗生素
抗性
基因用于阳性克隆的筛选)和多克隆位点。穿梭质粒(如pcDNA3.1)的独特性在于它具备两个复制起点,支持在原核和真核细胞中的表达。除了这些,还有转录调控和翻译表达元件、蛋白标签等特殊元件,例如,...
抗菌素
抗性标记筛选和抗性
基因插入筛选原理
答:
抗菌素
抗性
的
筛选
一般就是接种所抗的菌,看他是不是对他具有了抗性.例如,水稻就是应用剪刀粘取菌液,剪在叶片上这样就可以通过伤口,将菌接种到植株中.抗性基因的插入一般就是通过
载体
构建,将抗性基因连入载体,在通过转基因转到愈伤组织中,再成苗,如果转基因成功就对所抗物质具有抗性,一般我们都用一些...
基因工程中构建表达
载体
为什么要用
抗性
基因
标记
答:
基因工程是否成功就是看基因能否被成功表达,如果把表达
载体
用带有荧光或放射性的元素
标记
上,那么表达载体一旦被发现,就表明基因能成功转录翻译。 所以标记基因是为了判断基因能否表达,也可以用于删选成功表达基因的细胞~
抗性
基因在质粒上,怎样起
筛选
作用
答:
抗性
基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中.如果你的质粒是已经构建好,而且鉴定正确的,没有空
载体
质粒,那么,当你转化后,在
筛选
平板上转化(因为转化不是100%的效率,有些菌是没有质粒转入的),只有转入了该质粒的菌才能长起来,也就意味着这菌是带有你的目的基因.另外,抗性基因
和标记
...
pPIC3K的使用说明书,它的酶切位点等
答:
3' 测序引物及序列:3´ AOX1:5´-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3´载体标签:N-alpha factor
载体抗性
:氨苄和卡那
筛选标记
:HIS4 备注:利用alpha分泌因子,分泌表达蛋白。产品目录号:V175-20 稳定性:稳定 Stable 组成型:组成型 Constitutive 病毒/非病毒:非病毒 ...
质粒
载体
图谱上面的英文分别代表什么?
答:
图谱中的AmpR、KanaR等表示质粒
载体
中的
筛选
标签,多为抗生素
抗性
基因,方便后续通过抗生素筛选阳性克隆。特点是单词最后会以大写R或上标r结束。图谱中的MCS或者许多内切酶排排坐的部分,就是质粒的多克隆位点。多克隆位点为一系列限制性内切酶酶切位点,是外源DNA的插入位点,一般可通过酶切/连接的方式将...
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