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转染后24小时提蛋白
如何检测
蛋白
是否泛素化
答:
通过免疫共沉淀方法将某一特定
蛋白
以及与其结合的蛋白分离出来。分离出来的蛋白再进行SDS电泳和western blot分析。这一方法可以明确具体哪个蛋白的哪个赖氨酸残基发生了泛素化修饰。方法三:in vitro ubiquitination assay 将要研究的目的基因
转染
293细胞,使其大量表达。
24h后提取
并分离目的蛋白。在体外反应buffer...
转染
sirna后做q-pcr 做出来结果没区别怎么办
答:
2.siRNA
转染后
什么时候做
蛋白
检测(如Western Blot)最好?在mRNA水平下降后,接下来才会有蛋白水平的下降,一般来说,转染后48-72
小时
进行蛋白检测通常会得到较好的结果 EntransterTM-R4000是英格恩生物(Engreen Biosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂...
蛋白
表达实验的整个流程是什么?
答:
基因克隆:从感兴趣的源中
提取
目标
蛋白
的基因序列,并将其克隆到适当的表达载体上。常用的载体包括质粒和病毒。
转染
/转化:将重组的表达载体导入到宿主细胞中。对于真核细胞,常用的方法是转染;而对于细菌细胞,常用的方法是转化。培养和扩增:培养转染/转化后的细胞群落,并进行扩增,以获得足够量的表达...
质粒与siRNA
转染
试剂的选择
答:
RFect悬浮细胞质粒DNA转染试剂主要应用于悬浮细胞的质粒DNA转染,在293F中,转染阳性率可高达85%以上,在CHO-S中,转染效率可达50%以上,显著优于绝大多数同类试剂。特别地,RFect悬浮细胞质粒DNA转染试剂的细胞毒性很低,
转染后24小时
细胞死亡率不到10%。因而,随着培养表达时间的延长,目标
蛋白
的表达量...
实验技术-
转染
答:
转染
是真核细胞主动或被动导入外源DNA片段的过程,目的是使细胞获得新的表型或产生重组
蛋白
,增强或抑制特定基因的表达。转染可分为瞬时和稳定转染两种类型。瞬时转染常用于生产具有适当折叠和翻译后修饰的重组蛋白,而稳定转染则主要依赖于产生能持续表达外源基因的细胞系。转染方法主要有化学、生物和物理三种...
如何做好
转染
?
答:
在
转染
过程中,核酸和细胞质量的控制至关重要。高质量的DNA能显著提高转染效率,避免内毒素等有害物质对细胞的损害。细胞密度和健康状况也直接影响转染结果,过高的细胞密度或不健康的细胞状态均可能导致转染失败。因此,在进行转染实验前,需确保细胞处于适宜状态,通常在转染前
24小时
进行分板,以促进细胞...
细胞瞬转再传代加药,这样可以吗?传代后质粒会不会减少?
答:
如果你是第一次瞬转某个质粒,第一次要检测某个
蛋白
,可以先做一次预实验,看在什么时间段 蛋白的表达最高。根据细胞生长状态和密度可以进行传代再加药。培养时间长一般都有质粒丢失的情况,我们一般是在
转染后
72
小时
内就进行加药处理,因为转染时细胞密度有控制,一般不传代。
转染
实验注意事项(上)
答:
转染
实验注意事项:保证无RNA酶环境进行实验 环境和空气中含有大量的RNA酶,痕量的RNA酶即可对RRNA造成严重的降解。必须使用DEPC水或RNase-free水对RNA产品进行稀释。实验过程中,需避免RNA产品与人体皮肤或未经去RNA酶的实验耗材接触。因呼吸产生的气体和飞沫中均含有大量的RNA酶,所以必须佩戴口罩于超净...
protocol 分享|细胞
转染
和分析(稳转;瞬转)
答:
以293T细胞为例,进行PEI
转染
法的具体步骤包括:提前一天晚上铺板细胞至6 cm 皿,准备HBS溶液、PEI转染试剂、离心机和涡旋仪等材料。转染时,将质粒和PEI转染试剂混合,静置后加入细胞,6小时后更换新鲜培养基,
24小时
后检测基因表达情况。稳定转染步骤则包括稳转前得到病毒液,换液后加入过滤的病毒和细胞...
自己构建的
转染
质粒可以生产
蛋白质
吗?
答:
我记得我们选修的书里有说过,书中讲的是获得大量抗体,我想你应该能试试,如果你不急,我晚上回家给你看看,现在记不太清楚了。(追问一下)
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