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瞬转后想验证一下质粒,一般转染多久可以提
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第1个回答 2018-03-27
24h到48h~一般48h蛋白表达量会达到峰值~但需要根据具体细胞来定~
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细胞
瞬转
再传代加药,这样
可以
吗?传代
后质粒
会不会减少?
答:
如果你是第一次
瞬转
某个
质粒,
第一次要检测某个蛋白,可以先做一次预实验,看在什么时间段 蛋白的表达最高。根据细胞生长状态和密度可以进行传代再加药。培养时间长一般都有质粒丢失的情况,我们一般是在
转染
后72小时内就进行加药处理,因为转染时细胞密度有控制
,一般
不传代。
瞬转
是等细胞长满再收吗
答:
是。
稳转时24-48小时之间稀释传代
,瞬转时48小时后收细胞,细胞都会长的满满的。瞬转即瞬时转染,是指将外源质粒通过某种方式导入到细胞内得以表达;稳转即病毒感染,是利用慢病毒将外源插入整合到宿主细胞的基因组。
转染
是什么意思
答:
1、瞬时
转染
是指外源DNA或者RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续
几天,
多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋
质粒
DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。2...
做
瞬转可以
复苏细胞的时候直接加
质粒
吗
答:
不
可以,转染
是通过物理或化学方法将外源DNA转入细胞的过程,磷酸钙转染法和脂质体转染法为例,两种方法都需要在转染24h前进行细胞传代,且细胞密度达到60ml培养皿的60%-70%方可进行转染实验。而细胞复苏后,细胞未达到最佳的状态,活力为完全恢复,细胞密度未达到要求,故而不可用复苏细胞直接加
质粒
进行实验...
我要做脂质体
转染
到3T3-L1细胞看是否
质粒
会 表达。 但是3T3-L1买来是...
答:
步骤网上一大把。我用过lipofectimin2000和vigrous的,步骤都可以再网上查到的。你
转染
后也要分为瞬时转染和稳定转染的。稳定转染需要用抗性进行筛选,希望转染的
质粒
和基因组进行重组结合。瞬时转染的话,大概在48小时的样子,效果会比较好,不过这个不同的细胞是不一样的,需要你自己摸索下了。
质粒转染
的blank中加质粒吗
答:
一般来说,超螺旋
质粒
DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定
转染,
外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源...
怎样检测
转染
对细胞增殖是否有影响
答:
我现在想做
瞬转,
然后24,48,72小时后检测
转染
的载体对细胞增殖的影响.我所转染的是连有目的片段的PCDNA3.1载体,这种载体是不带荧光的.请问各位大侠,我该用什么方法来检测我的转染是否成功呢?DXY721认为 检测转染成功与否的方法很多,流式,RT-PCR,WB应该都可以 eastICEbird建议 是不是可以和有...
转染
是什么意思
答:
为了提高
转染
效率,通常使用超螺旋
质粒
DNA,这是一种紧密的质粒形态
,可以
更好地进入宿主细胞。在转染后24-72小时内,可以通过报告系统如荧光蛋白、β半乳糖苷酶等来检测基因表达的水平。2、稳定转染 稳定转染是指外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体存在。在稳定转染中,外源DNA的整合...
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