免疫球蛋白的检测方法？

Question

我希望哪个高手能把免疫球蛋白的检测方法打上来，名字和过程方法都要，越多越好！！急，在线等……

Answer 1

　　[项目名称] 免疫球蛋白
　　[英文缩写] Ig

　　[参考值] IgG7.0～17.0 g／L
　　lgA0.7～3.8 g／L
　　IgM0.6～2.5 g/L
　　lgD<200 IU／ml(0.6～2.0mg／L)
　　IgE<100 IU／ml(0.13～0.92mg／L)

　　[临床意义]免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，主要存在于生物体血液、组织液和外分泌液中，是检查机体体液免疫功能的一项重要指标。人类的免疫球蛋白分为五类，即lgG、lgA、lgM、IgD和lgE，其中IgD和IgE含量很低，故我们常规所测定的Ig主要为lgG、lgA、IgM三项。血清中免疫球蛋白异常，主要可分为三类：
　　(1)几种不同的Ig水平增加：主要见于感染、肿瘤、自身免疫病、慢性活动性肝炎、肝硬化及淋巴瘤等。自身免疫病中，如系统性红斑狼疮(SLE)以lgG、lgA、IgM升高多见，类风湿性关节炎以IgG、IgM升高多见。
　　(2)单一的Ig水平增加：又称为“M”蛋白病，主要见于：
　　①多发性骨髓瘤(MM)，表现为仅有某一种Ig异常增高，而其他种明显降低或维持正常。其中以IgG型MM最常见，血清中lgG含量可高达70g／L，IgA型次之，IgD型较少见，IgE型最为罕见。
　　②巨球蛋白血症，是产生IgM的浆细胞恶性增生，血清中IgM可高达20g／L以上。
　　③一种或多种Ig水平减少：分为原发性或继发性的，前者属于遗传性，如瑞士丙种球蛋白缺乏症，选择性IgA、IgM缺乏症等。继发性缺损见于网状淋巴系统的恶性疾病、慢性淋巴细胞性白血病、肾病综合征、大面积烧伤烫伤患者、长期大剂量使用免疫抑制剂或放射线照射所致。
　　lgD升高主要见于lgD型MM。流行性出血热、过敏性哮喘、特应性皮炎患者IgD升高。妊娠末期、吸烟者中IgD也可出现生理性升高。
　　IgE升高常见于超敏反应性疾病，如过敏性鼻炎、外源性哮喘、枯草热、慢性荨麻疹，以及寄生虫感染、急慢性肝炎、药物所致的间质性肺炎、支气管肺曲菌病、类风湿性关节炎和IgE型MM等。

Answer 2

异常血清免疫球蛋白检测方法学探讨（vip资料）
需付费下载

保健食品检验方法－－ig检验
sfda网站和保健食品相关网站上都可以检索到。

关于牛初乳及其制品中免疫球蛋白G的检测方法

溶液配制：

1） 缓冲液A： 0.05mol.L-1磷酸二氢钠溶液（pH6.5）；

2） 缓冲液B: 0.05mol.L-1甘氨酸溶液（pH2.5）；

3）IgG贮液：sigma公司IgG配成浓度约4mg.mL-1溶液，冷冻浓缩至200mL。

样品制备和检测：取一定量牛初乳粉，溶解于缓冲液A，制成浓度2mg/mL的溶液，用0.45mm微滤器过滤后进样。按下表方案使用缓冲液B梯度洗脱。控制不同进样体积（25~200mL）产生标准响应曲线（5mg到70mg）。IgG贮液用缓冲液A稀释后，制成IgG标准曲线（4~40mg）。通过280nm处吸收值监测洗脱液蛋白浓度。

表1 蛋白质G亲合HPLC的梯度洗脱条件

时间（min） 流速（ml/min） %A %B 梯度
0 1.0 100 0 -
0.5 1.0 100 0 -
1.0 2.0 100 0 线性
1.5 2.0 0 100 -
4.0 2.0 0 100 线性
5.0 1.0 100 0 -
7.0 1.0 100 0 -

具体操作可参阅国标GB/T 5009.194- 2003和曹劲松《初乳功能性食品》第10章。

3、 RID与HPLC的比较

一般地，HPLC检测结果将高于RID检测结果。

我们实验室对比研究了牛初乳IgG抗原决定簇部位（或第二抗体结合部位）和蛋白质G结合部位的变性动力学，证实：在实验温度（69℃~81℃）范围内，IgG分子上蛋白质G结合部位在热处理过程中更为耐热，或者说IgG抗原决定簇部位相对更为热敏感。从而，揭示了上述现象的本质：RID测到的IgG在整体变性程度上低于HPLC测到的IgG。因此，国外一些将RID和ELISA方法测定的IgG含量视为“免疫活性IgG”是比较科学的。

在各温度下IgG分子上蛋白质G结合部位变性反应各温度下的D值均比IgG分子上第二抗体结合部位变性反应的相应温度下的D值大，说明IgG分子上蛋白质G结合部位在热处理过程中要比IgG抗原决定簇部位更为耐热。该温度范围内IgG分子上抗原决定簇部位热变性活化能（270.55kJ/moL）大大低于IgG分子上蛋白质G结合部位热变性活化能（316.42kJ/moL）。在该温度范围内IgG分子上第二抗体结合部位变性反应的Z值为9.34℃，IgG分子上蛋白质G结合部位变性反应的Z值为7.25℃，可认为：IgG分子上第二抗体结合部位的稳定性在上述温度范围内相对恒定，而蛋白质G结合部位的稳定性相对容易随温度发生变化。在酸性乳清溶液中，也获得类似的研究结论。
上述研究结果即将发表于《Journal of Agricultural and Food Chemistry》和《Journal of Food Science》。

4、其它

随着未来技术的发展，并不排除其它可能的IgG检测方法。例如ELISA法，国内已经建立，而且有国外公司可提供试剂盒。