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研究生一年级,老板让做一个稳转细胞系,该怎么操作??
如题所述
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推荐答案 2016-01-30
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大,如果经费充足可以直接找公司包毒的。
追问
慢病毒之前有所耳闻,但不是很了解,不知道如何自己包装的话,难度大不大呢?
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如何让
一个细胞
过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转 ...
答:
稳转的话一般需要在质粒上构建某个抗性基因,如嘌呤霉素抗性
。这样用抗性培养基多次筛选就可以筛选出稳转的细胞株,但是比较难。
细胞系
建好了,表型实验想好
怎么做
了吗?
答:
在研究疾病的细胞模型中,你或许希望在过表达、敲降或敲除潜在药物靶点的基础上,高通量筛选药物分子库,从而鉴定出潜在的治疗药物,又或者是需要进行特定物质细胞毒性的检测,比如药物筛选, 那你可以通过细胞毒性检测来筛选敏感化合物,或者筛选不同
细胞系
对某一化合物多个浓度的敏感性。 实现细胞毒性检测...
一个顺转
一个稳转
可以做对照吗
答:
一个顺转
一个稳转
可以做对照。根据相关资料查询,瞬时转染与稳定转染都是将目的基因转染至特定哺乳动物
细胞
内,进而表达得到目的蛋白。不同的是瞬时转染的方式外源基因并没有转染到细胞的染色体上而是存在于游离的载体上,这样可以在短时间内获得基因的表达产物,但是随着细胞的不断分裂增殖外源基因最终会丢失...
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