怎样确定一个基因是否被敲出

Question

如题所述

Answer 1

很简单，直接以靶基因的敲除位点为模板做PCR，如果是阴性，就是敲除成功。或者是提RNA后做RT-PCR。由于基因敲除往往不是敲除的整段基因，所以引物设计的时候要针对敲除的那个部位。
楼上说的只能表明外源基因的进入，但不能证明目的基因已经被去掉了。

Answer 2

看你用什么生物载体做了，方法不一而足。给你举个细菌的例子，一般会用一种抗药选择基因替代在原敲除基因的位置，这样，只要经过基因敲除的细菌，都会带有抗药性，可以再选择平板生长。在其他生物中，我们还可以用荧光基因等代替敲除基因等进行筛选，反正原理基本如此方法有很多。
请问楼上，基因敲除你不做筛选怎么培养？

Answer 3

可以从基因组、表达、蛋白水平分别检测:
1:以启动子或者标记基因为探针做southern 杂交。(PCR也可以，但不够准确)
2:以野生型（或者转基因阴性）为对照，检测该基因的表达量是否降低。（RT-PCR、realtimePCR、northern blotting）
3:合成该基因的抗体，以野生型为对照做western检测。