如何克隆未知基因

如题所述

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第1个回答 2015-10-30

题干条件不足无法作答

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求助,怎么克隆一段未知序列的基因答：如果时间允许就先分离纯化该酶蛋白，然后作质谱分析其C端和N端序列，然后据此设计引物，克隆分析。（转载，仅供参考）

未知基因克隆与表达的研究途径答：首先根据同源基因比对，然后在保守区域设计间并引物，先将保守区域克隆。然后根据保守区域设计基因特异引物，进行5’RACE及3’RACE，分别拿到保守区域两端的片断，然后序列拼接，拼出全长序列后，在基因两端设计一对引物将基因全长CDS克隆。表达策略：1 反向遗传学：克隆的CDS可以亚克隆到特定的表达载体，并...

如何克隆一功能已知但序列未知的真核生物的基因?答：由功能推知基因编码的氨基酸序列，进而得出密码子序列，最后得到基因的脱氧核苷酸序列，然后进行人工合成，用PCR技术增殖即可。

基因克隆的方法主要有哪几种?简述各种方法的原理和用途。答：通过整合与切出反应，实现基因的快速克隆和平行转移。该技术保障了大规模克隆基因组和注释的可译框架。(4)图位克隆：首先定位目的基因到染色体的特定位置，然后通过染色体步移技术克隆位于两个紧密连锁标记之间的基因片段。后续通过基因功能互作原理来鉴定目的基因，用于分离未知性状相关基因。

基因克隆的方法主要有哪几种?简述各种方法的原理和用途。答：并在其两侧确定紧密连锁的RFLP或RAPD分子标记。其次通过对许多不同的生态型及大量限制性内切酶和杂交探针的分析，找出与目的基因距离最近的RFLP标记，通过染色体步移技术将位于这两个标记之间的基因片段克隆并分离出来。然后，根据基因功能互作原理鉴定目的基因。用途：分离未知性状的目的基因。

克隆一个未知的基因拿到序列需要多久?答：2 引物合成送到后，使用制备好的脑 cDNA模板利用简并引物进行PCR，然后电泳检测，这个阶段紧凑的话1-2天。3 如果成功克隆出了目的条带，那么就要回收，做TA克隆，然后测序。简并引物克隆出的条带貌似不太适合直接回收测序的。这个过程，片段回收、与T载体连接过夜、连接后转化至感受态细菌、涂板过夜培养...

插入突变是怎样分离克隆目的基因的?答：获得突变体进行未知基因的克隆是常用的方法之一，如T-DNA标签法和转座子诱变分离克隆目的基因的例子。T-DNA标签法是将T-DNA在任何感兴趣的基因处产生插入性突变，获得分析该基因功能的对照突变体，它将T-DNA左右边界之间携带的外源报告基因片段作为一个选择性的遗传标记，因为插入的序列是已知的，因而对...

随机引物法克隆未知序列基因的介绍哪能找到?生物实验方面的网站有哪些...答：首先将AP-PCR检测到的特定片段从凝胶中切下,提取DNA克隆到适宜的载体内(如TA载体),再测定其核苷酸组成。根据其核苷酸组成设计2个方向相反的引物(P-1,P-2)。引物长度多在20 nt以上;退火温度在60℃以上;(2)将基因组DNA做适当酶切,然后在其两端连接上相同的接头,。根据接头的序列扩增。双链DNA探针...

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