第1个回答 2024-08-16
单细胞分离在单细胞测序中是一个极具挑战的过程，因其复杂性、操作难度及成本高昂，限制了其进一步的发展。然而，随着单细胞分离技术的不断进步，细胞损耗和操作成本显著降低，单个细胞的捕捉速度和准确性也显著提高。目前，单细胞分离的方法包括口吸管技术、极限稀释技术、激光捕获显微切割技术、荧光流式细胞分选技术和微流控技术等。
口吸式技术：通过显微镜观察，选择形态良好的细胞，使用吸管技术吸出单个细胞。这种技术可以获得完整的细胞形态和几乎没有损伤的细胞，但需要熟练的操作者，且受人工干扰较大。
极限稀释法：许多实验室和企业采用手工吸液器将细胞悬液稀释，从而将单个细胞从体内分离出来。这种方法操作简便、成本低廉，但细胞易失活，效率低下。
激光捕获显微切割技术：这是一种能够将实体组织标本中的单细胞或胞间室分离出来的新技术。操作者在显微镜下观察组织，并划出要切割的路径，用激光进行切割。这种方法可以用于活体组织解剖，提取活细胞进行培养和分析，但操作较为复杂。
荧光流式分选法：通过荧光染色或标记的单细胞悬浮液，在压力作用下被压进流动室，利用荧光探测和瞬间充电技术分离出目标细胞。这种方法适用于高通量分离，但需要分离能力的流式细胞仪、稳定的荧光标记物和荧光染色剂，且对样本量有一定要求。
微流控技术：利用流体力学原理，将水和油从不同的微管道中分离，形成微反应系统。这种方法可以用于单细胞的分析和处理，如10x Genomics Chromium平台，可以在短时间内自动捕获大量细胞，但需要特殊设备和高昂的耗材。