在1506年，西斯廷教堂的穹顶画是儒略二世，即西克斯图斯四世的侄子，委托米开朗基罗进行创作的。尽管米开朗基罗以雕塑家的身份闻名，但他在1508年开始了这项艰巨的任务，独自承担了从脚手架设置到画作创作的全过程。这幅作品于1512年完成，穹顶中心展示了创世纪的九个场景，场面宏大，人物众多，堪称米开朗基罗的代表作。拉斐尔在创作《雅典学派》时，也被此画深深影响，他曾前来观摩。
二十年后，克莱孟七世聘请米开朗基罗设计了祭坛背面的壁画，这部作品以《马太福音》中的“最后的审判”为主题，分为四个层次：天使群像、以耶稣基督为中心的天堂、被拖入地狱的人群，以及米开朗基罗根据但丁的《神曲》创作的地狱部分。尽管作品中裸体人像众多，曾引起争议，但保禄三世死后，部分遮羞布被移除，展现了作品的原始风貌。
梵蒂冈的西斯廷教堂，作为宗教活动的重要场所，长期受蜡烛熏染，穹顶画和壁画遭受了严重的损害。近年来的修复工作使这些艺术珍品恢复了原有的鲜艳色彩，部分遮羞布也被除去，让人们得以更直观地欣赏到米开朗基罗作品的原貌和力量。
西斯廷教堂始建于1445年，由教皇西斯都四世发起创建，教堂的名字“西斯廷”便是来源于当时的教皇之名“西斯都”。教堂长40.25米，宽13.41米，高20.73米。是依照《列王纪》第6章中所描述的所罗门王神殿，按照比例(60:20:30)所建。西斯廷教堂是罗马教皇的私用经堂，也是教皇的选出仪式的举行之处。