试述pBR322和puc18的结构特点。

Question

如题所述

Answer 1

【答案】：pBR322是经过人工改造而首批在基因工程中使用的质粒载体之一。松弛型复制质粒，拷贝数为20～30，用氯霉素处理可达上千个拷贝。具有多种常用的限制性核酸内切酶的单一位点。具有双抗选择标记：抗氨苄青霉素基因Amp和抗四环素基Tet^r。如果将这种质粒导入无质粒的、对抗生素敏感的细菌寄主细胞中，则细菌寄主的表现型将获得对以上两种抗生素的抗性。这种质粒的抗四环素基因当中，具有若干酶切位点。当目的基因插入到这些位点时，位点所在的抗四环素基因将表现失活，但与这些位点无关的抗氨苄青霉素基因不受影响。
pUC18的特征：这种质粒的大小只有pBR322的一半，能够携带更长的外源DNA片段。这种质粒在每个受体细胞中产生的拷贝数是pBR322拷贝数的5至10倍。多克隆位点区域位于这种质粒携带的大肠杆菌lacI基因之中，所以含有这种质粒的细菌寄主细胞在含X-gal混合物的培养基上将产生蓝色的菌落。如果将外源DNA片段捅入到这个多克隆位点中，则lacI，基因将会受到干扰而表现失活，从而使具有这种质粒的细菌细胞形成白色菌落。因此，通过细菌菌落的颜色就能够将有或无外源DNA片段的细胞加以区别。