牛的细胞培养传代试验是什么?

Question

如题所述

Answer 1

牛的细胞培养传代实验指的是：
细胞培养用的生长液为含犊牛血清10%，青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml的RP-MI1640液。维持液除犊牛血清含量为2%外，其他成分与生长液相同。培养液用IMHCl溶液调整pH值至7、2左右。细胞培养分离病毒传代可分两种方法：①转管培养法，所用转管是带有抗高压，圆底、密封塑料螺旋盖的长152mm，内径11mm的中性、硬质透明玻璃管。转管培养是将装有2ml（浓度为1、5×105个细胞/ml）BHK21细胞混悬液的转管30°角斜放，37℃下旋转培养2～3d，待形成良好单层时，换入等量维持液。每管接种0。1ml用维持液作10倍稀释的受检病牛全血，每份病料各分别接种4管，置转管培养架上旋转（8转/h）进行培养。同时设不接种血样的细胞对照4管。培养5～6d，每天换维持液，至第7d，无论形成细胞病变（CPE）与否，均收获。置-40℃与37℃下冻融3次后作为传代材料，然后按上述方法剂量传代。如第3或第4代细胞出现CPE，则连同对照进行超薄切片和负染，作电镜检查。根据CPE和负染色电镜观察结果，最后判定受检血样有无BEFV。②静止培养法，如无旋转培养设备，可用培养液装量4ml，接种量为0。2ml，总容量30ml的小方瓶，置37℃静止培养，再按转管培养方法步骤进行传代和结果判定。