第1个回答 2020-02-19
精浆弹性硬蛋白酶(PMN-Elastase)精浆弹性硬蛋白酶是检测炎症的手段之一,精浆弹性硬蛋白酶可作为静止型生精浆弹性硬蛋白酶检测原理
包被于固相载体的抗弹性硬蛋白酶单抗可与精浆中弹性硬蛋白酶相结合,结合的待测物再与特异性酶标记物反应,最后通过底物显色,其吸光度大小与精浆标本中弹性硬蛋白酶浓度相关。
检测步骤
(1)准备适当数量的包被微孔。标准品、稀释标本加样量均为100μl/孔。五个标准品浓度依次为3000、1500、750、375
和0ng/ml(以标本稀释液作为0
标准)。
(2)用封片膜封板。以孵育振荡器(350
~400rpm)室温(18
~28℃)反应60min。
(3)弃去封板膜。洗板:
以洗涤液注满微孔,每次浸泡1min,共洗板5
次。扣干。
(4)每孔加酶结合物100μl。用封板膜封板。以孵育振荡器(
350
~400rpm)
室温(18
~28℃)反应45min。
(5)弃去封板膜。洗板:以洗涤液注满微孔,每次浸泡1min,
共洗板5
次。扣干。
(6)每孔加显色液100μl,
室温避光反应20min[显色液临用前配制。方法是:显色剂A:
显色剂B按体积比40:
1混合(
如显色剂A
400μl
+
显色剂B
10μl),显色液配制后30min
内使用]。
(7)
每孔加终止液100μl,充分混匀。15min
内上酶标仪双波长450/630nm
比色。
判断标准
判断标准数值:<
290ng
/ml,
隐性感染:
290
~1000ng/ml,
确证感染:
>
1000ng/ml。急性炎症时,
弹性硬蛋白酶复合物浓度迅速从正常水平升高超过290ng/ml,
直到炎症被治愈,
否则还是保持高水平。当临床上检查到有微生物感染,
炎症即可被诊断。殖道感染的诊断及愈后检测指标。临床上主要用于检查男性生殖道感染。