粗提取植物DNA的实验步骤和原理

如题所述

提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理:CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。步骤如下:
1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中;
(2)加入800 μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min;
(3)小心吸取上清液,加入等体积的酚:氯仿(各400μl)溶液,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(4)小心吸取上清液,加入等体积的氯仿,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min。
(5)重复步骤(4)1-2次,以蛋白层不出现为止;
(6)取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(7)弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀2次;
(8)室温下干燥后(一般干燥5-15 min),溶于30-50 μl DEPC去离子水中,于-20℃或者-70℃下保存备用。
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
第1个回答  2012-05-29
还有更简单的,碱法提取DNA.
NaOH处理法制备水稻基因组PCR模板
(1)取约0.01g水稻叶片于1.5mlEP管中,加少许液氮用玻棒磨成粉末。
(2)加入200µl0.25mol•L-1 NaOH,沸水中煮35S。
(3)取出EP管,依次加入200µl0.25mol•L-1 HCl和100µl 0.5 mol•L-1Tris-HCl (pH8.0),沸水中煮2min。取出EP管颠倒数次,静置分层,以其上清液为PCR模板
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