一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori,即控制复制起始的位点.原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点.而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点. 抗生素抗性基因：可以便于加以检测,如Amp+ ,Kan+ 多l 克隆位点：MCS 克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA 作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori 的位置,了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori 的箭头指复制方向,其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）. 第二步：再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记： （1）Ampr：水解β -内酰胺环,解除氨苄的毒性. （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞. （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性. （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶,使G418（卡那霉素衍生物）失活. （5）hygr：使潮霉素β 失活. 第三步：看多克隆位点（MCS）.它具有多个限制酶的单一切点,便于外源基因的插入.如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,而便于筛选.决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因. 第四步：再看外源 DNA 插入片段大小.质粒一般只能容纳小于10Kb 的外源DNA 片段.一般来说,外源DNA 片段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低. 第五步：是否含有表达系统元件,即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号.这是用来区别克隆载体与表达载体.克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体.选用那种载体,还是要以实验目的为准绳. 相关概念： 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA 转录的DNA 顺序,这个DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游,是DNA 分子上可以与RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录. 增强子/沉默子－为真核 l 基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序.其作用与增强子所在的位置或方向无关.即在所调控基因上游或下游均可发挥作用.沉默子－负增强子,负调控序列. 核糖体结合位点/起始密码/SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖体的两个结合位点,对于原核而言是AUG（起始密码）和SD 序列. l 转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列,此位点 down－stream 有一段 GT 或 T 富丰区,这2部分共同构成 poly （A）加尾信号.结构基因的最后一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列,此位点 down－ stream 有一段GT 或T 富丰区,这2部分共同构成poly（A）加尾信号. 三、载体及其分类 载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞）,需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞,这种运载工具就叫做载体（vector）. P.S.基因工程所用的vector 实际上是DNA 分子,是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA.
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