诱导原生质体融合的方法

Question

如题所述

Answer 1

诱导原生质体融合的方法如下：

诱导原生质体融合的过程中可用的方法有三种：物理法、化学法、生物法。将不同植物体细胞放在一起培养，必须通过一定的技术手段进行人工诱导。诱导方法有物理法和化学法两大类。

物理法就是利用离心、振动、电刺激等促使原生质体融合；化学法是用聚乙二醇等试剂作为诱导剂诱导细胞的原生质体融合，聚乙二醇简称为PEG；诱导动物细胞融合时还可以用生物法，即用灭活的病毒进行诱导，重压不能促使原生质体的融合。

植物体细胞杂交,又称原生质体融合是指将植物不同种、属，甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁，未脱壁的两个细胞是很难融合的，植物细胞只有在脱去细胞壁成为原生质体后才能融合，所以植物的细胞融合也称为原生质体融合。

其诱导融合的可能机制是PEG带有负电荷的醚键，与带负电荷的原生质体相遇后，在Ca2+等阳离子作用下形成共同的静电荷，从而促进异源原生质体的黏着和接合，常用的PEG是相对分子量为4000和6000的两种。在有钙离子存在的条件下融合时为碱性能刺激产生最大的融合频率。

这是因为pH值能够改变体系的电性状态，从而影响原生质体的融合。PEG既是融合剂又是渗透压稳定剂，浓度低于20%会使原生质体破裂而失去稳定性，浓度过高又会引起原生质体收缩而降低融合频率。

因此，融合时PEG的最终浓度常采用30%～40%。由于PEG的加入，原生质体间的黏着强烈地发生，融合就能较长时间有效地进行，所以PEG的处理时间不得太长。此外，PEG在高浓度下有毒，因此也要求融合时间不宜过长。