这是实验室制备法
1.材料:淀粉,玉米淀粉、甘薯淀粉或木薯淀粉;
2.生化及化学试剂:
液化型α-淀粉酶(酶活力6000单位/g);糖化酶(酶活4~5万/g);费林溶液A、B[1];亚甲基兰指示剂;D-葡萄糖标准溶液[2];10%NaOH;5%Na2CO3;5%CaCl2。
3.仪器:500mL三角烧瓶;250mL园底烧瓶;容量瓶(100mL,500mL,1000mL);移液管(1mL,5mL,25mL);50mL纳氏管,25mL滴定管;250mL碘量瓶;秒表;搅拌器;恒温水浴锅。
四、实验过程
1.淀粉糊化及水解
称取100g淀粉于500mL三角烧瓶中,加水200mL,搅拌均匀;用5%Na2CO3调节pH为6.2~6.3,加入2mL5%CaCl2溶液,于90~95℃水浴加热并不断搅拌,淀粉浆逐渐糊化并至完全。加入液化型α-淀粉酶60mg,不断搅拌使其液化,温度保持在70~80℃搅拌20min,取样分析DE值。然后将烧瓶移至电炉(隔石棉网)加热至沸,灭酶10min;过滤,滤液冷却至55℃,加入糖化酶200mg,调pH4.5,于60~65℃恒温水浴中糖化3~4h(3h取样分析并控制DE≈42)即为淀粉糖浆。也可将其进行适当的浓缩,得淀粉浓浆。
2.DE值的测定
按国标GB12009-89方法测定。
⑴混合费林溶液的标定
①移取25mL混合费林试剂于烧瓶中,移液管加入18mLD-葡萄糖标准溶液(精确称量0.600g无水D-葡萄糖加水配成100mL溶液),振荡后迅速升温,控制在2min±15s时间内沸腾,保持蒸汽充满烧瓶,以防空气进入,持续2min后,加入1mL亚甲基兰指示剂,用D-葡萄糖标准溶液滴定至蓝色刚好消失,记录消耗的葡萄糖标准溶液的体积(mL)。
②调整D-葡萄糖初次加入量为0.3mL,其余步骤同上,但滴定过程要在1min内完成,整个沸腾时间不超过3min。记录滴定时消耗的D-葡萄糖标准溶液的体积V1(mL)。
③第三次滴定时,为达到时间上的要求,可调整D-葡萄糖的初加量,其余步骤同上,控制终体积数在19~21mL之间。记录第二次滴定的D-葡萄糖标准溶液的平均体积消耗数V1(mL)。
⑵样品的测定:移取25mL混合费林试剂于烧瓶中,滴加10mL样品溶液,加热,使溶液在25min±15s内沸腾并保持瓶内充满蒸汽,加1mL亚甲基兰指示剂,再用D-葡萄糖标准溶液滴定至蓝色消失。如果在样品溶液中未加任何指示剂时蓝色已经消失,则要降低样品液的浓度,重新滴定。但耗用的体积V1应不大于25mL。
样品大约还原力(ARP)的计算公式为:
其中:ARP为样品大约还原力,g/100g
F为0.6×V1/100=0.006×V1
m0为500mL样品溶液中样品重量,g
所以,样品的g数可用下式计算:m0=300/ARP
称取m0g样品(精确至1mg),样品中还原糖含量在2.85~3.15g之间,重复标准样品的滴定,记录样品液的体积耗用数V2mL,V2应在19~21mL之间,否则需调整样品液浓度。
样品还原力RP=300V1/(V2×m)
其中:V1为标准样品溶液体积耗用数,mL
V2为样品溶液体积耗用数,mL
m为500mL样品溶液中样品重量,g
DE=RP×100/DMC
其中:DE为样品葡萄糖值,g/100g
RP为样品还原力,g
DMC为样品干物质含量,%
五、备注
[1]:费林溶液配制:
费林溶液A:CuSO4.5H2O69.3g加水溶解并稀释至1000mL
费林溶液B:酒石酸钾钠346.0g和NaOH100.0g加水溶解至1000mL。
使用前A液和B液等量混合。若有沉淀,过滤,使用清液。
[2]:D-葡萄糖标准溶液配制:称取0.600g无水D-葡萄糖溶解于少量水中,移于100mL容量瓶中,加水至刻度,摇匀。要求使用当天配制的新鲜溶液。
参考资料:http://jpkc.snnu.edu.cn/fch/web/Info_Show.asp?ArticleID=226